本文關(guān)鍵詞：Rho相關(guān)激酶ROCK在缺氧致心肌細(xì)胞凋亡中的表達(dá)及作用機(jī)制　出處：《南昌大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的 通過(guò)建立體外心肌細(xì)胞缺氧模型,觀察ROCK在不同缺氧時(shí)間點(diǎn)的表達(dá),探討其在心肌細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制。 方法 1.取健康乳鼠(出生1-3d),利用0.08%胰酶和1.00%II型膠原酶依次消化心肌組織,混懸液經(jīng)差速貼壁2h后,加入0.1mM5,-Brdu抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),以1*106/ml的細(xì)胞密度接種于35mm的培養(yǎng)皿中,待心肌細(xì)胞生長(zhǎng)接近會(huì)和狀態(tài)及呈現(xiàn)同步搏動(dòng)時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。 2.利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌細(xì)胞缺氧模型,分別缺氧培養(yǎng)1h、3h、6h、9h,以常規(guī)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞作為對(duì)照,檢測(cè)ROCK-1、ROCK-2的表達(dá)。 3.取ROCK-1、ROCK-2表達(dá)的高峰時(shí)間點(diǎn), Erk5阻斷劑PD98059(終濃度20umol/L)進(jìn)行缺氧處理后,檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的變化。 4.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡,MTS檢測(cè)細(xì)胞存活率,Western blotting檢測(cè)ROCK-1、ROCK-2、Erk5、p-Erk5、Caspase-3、PI3K、p-PI3K的表達(dá)情況。 結(jié)果 1.缺氧1h、3h、6h、9h后,心肌細(xì)胞凋亡率分別為8.76±1.51%,15.36±2.34%,26.50±3.43%,41.96±4.22%,與對(duì)照組(2.6±0.34%)比較均有顯著性差異,(均P0.01);存活率分別為93.20±4.12%, 86.14±3.10%,75.53±7.25%,60.21±6.75%,與對(duì)照組(97.60±1.12%),比較均有顯著性差異,(均P0.05) 2.ROCK-1、ROCK-2缺氧1h即開(kāi)始升高,3-6小時(shí)表達(dá)達(dá)高峰,9小時(shí)開(kāi)始回落,且均明顯高于對(duì)照組(P0.05)。 3.Caspase-3在缺氧1小時(shí)開(kāi)始逐漸升高,在隨后觀察的時(shí)相點(diǎn)內(nèi)持續(xù)處于高表達(dá)狀態(tài),與對(duì)照組比較均有顯著性差異(均P0.01)。 4.PI3K各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)無(wú)明顯變化,而p-PI3K在缺氧1h后開(kāi)始升高,3小時(shí)達(dá)高峰,6小時(shí)開(kāi)始回落,9h表達(dá)基本消失,各時(shí)間點(diǎn)比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 5.Erk5缺氧1h即開(kāi)始升高, 3-6小時(shí)表達(dá)達(dá)高峰,9小時(shí)開(kāi)始回落,且均明顯高于對(duì)照組(P0.05)。 6.Erk5阻斷劑處理后,心肌細(xì)胞凋亡率較單純?nèi)毖?h組明顯升高(P0.01),存活率較單純?nèi)毖?h組明顯下降(P0.01);ROCK-1、ROCK-2較單純?nèi)毖?h組升高(P0.05) 結(jié)論 1.ROCK-1、ROCK-2在缺氧后表達(dá)逐漸升高,與細(xì)胞凋亡的過(guò)程相一致,表明ROCK可能參與了缺氧致心肌細(xì)胞凋亡的過(guò)程。 2.ROCK通過(guò)抑制p-PI3K信號(hào)途徑,促缺氧心肌細(xì)胞凋亡。 3.Erk5可能通過(guò)抑制ROCK的活性對(duì)抗缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。 4.ROCK可能通過(guò)激活Caspase-3引起缺氧心肌細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1350609