本文關鍵詞：人C5a受體與金黃色葡萄球菌分泌趨化抑制蛋白的相互作用以及翻譯后酪氨酸硫化修飾的重要意義　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的：探討金黃色葡萄球菌分泌的趨化抑制蛋白(CHIPs)與趨化因子C5a受體(C5aR)或促�；鞍资荏w(C5L2)的相互作用及C5aR氨基末端酪氨酸硫化修飾對其與CHIPs結(jié)合能力的影響。 方法： 1.提取耐甲氧西林金黃色葡萄球菌標準菌株ATCC29213的基因組DNA,設計引物體外擴增趨化抑制蛋白編碼基因chp,重組CHIPs表達載體,原核表達并純化CHIPs蛋白,測定純化樣品的濃度。 2.外周血提取RNA并逆轉(zhuǎn)錄,設計引物體外擴增C3aR, C5aR, C5L2, CXCR3和PTAFR,分別表達于HEK 293T細胞上并通過western blot進行鑒定。 3.將純化的CHIPs蛋白分別與表達C3aR,C5aR,C5L2,CXCR3或PTAFR的HEK293T孵育,通過Western blot方法檢測其結(jié)合能力。 4.非特異性硫化抑制劑NaClO3干預表達C5aR的HEK 293T細胞,檢測不同濃度的NaCl03對C5aR與CHIPs結(jié)合能力的影響；比較了TPST或shRNA共轉(zhuǎn)染的C5aR與CHIPs蛋白親和能力的變化；將C5aR氨基末端第11位或(和)第14位的酪氨酸突變成苯丙氨酸,證實這兩個位點的酪氨酸硫化修飾對C5aR與CHIPs親和能力的重要性。 結(jié)果：本實驗構建了重組CHIPs和多種趨化因子受體表達載體,得到純度較高的CHIPs蛋白樣品,濃度為96μg/ml,并將C3aR, C5aR, C5L2, CXCR3和PTAFR分別表達在HEK 293T細胞上。通過western blot方法測定CHIPs蛋白與C5aR相結(jié)合,與C3aR, C5L2, CXCR3和PTAFR無明顯結(jié)合信號。NaC103對C5aR與CHIPs結(jié)合能力的影響具有濃度依賴性；當NaCl03終濃度達到50mmol/L時,C5aR與CHIPs結(jié)合能力較對照組減弱76.47%；與TPST共轉(zhuǎn)染的C5aR與CHIPs結(jié)合能力增強2.3倍,而與shRNA共轉(zhuǎn)染的C5aR與CHIPS的結(jié)合能力未見顯著減弱；當C5aR的N端第14位的酪氨酸突變成苯丙氨酸時,C5aR與CHIPs的親和能力較野生型下降76.32%,而當C5aR的N端第11位和第14位的酪氨酸都突變成苯丙氨酸時,C5aR與CHIPs幾乎不存在結(jié)合。 結(jié)論：人C5aR,非C5L2,是CHIPs蛋白的天然受體。研究證實C5aR的N端第14位的酪氨酸硫化修飾對于C5aR與配基的結(jié)合具有非常重要的作用。
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【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 高金明,林耀廣;趨化因子及其受體與氣道疾病關系的研究進展[J];基礎醫(yī)學與臨床;2004年04期

2 高金明;趨化因子CXC受體3在博萊霉素誘導的肺纖維化中的作用[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2005年01期

3 高金明;補體3a受體第2胞外上174位硫化酪氨酸形成其配基結(jié)合位點[J];中國醫(yī)學科學院學報;2004年03期

4 高金明;馮起平;左瑾;方福德;蔣磊;郭子健;;酪氨酸硫化修飾對酪氨酸硫化轉(zhuǎn)移酶活性的調(diào)節(jié)[J];中國醫(yī)學科學院學報;2007年02期

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本文編號：1350447