本文關(guān)鍵詞：高糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞AE2表達(dá)的動(dòng)態(tài)改變及機(jī)制　出處：《南昌大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 糖尿病高血糖 血管內(nèi)皮細(xì)胞 AE2 AP1 EMSA

【摘要】：目的:建立體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)高糖損傷模型觀察陰離子交換蛋白-2(AE2)表達(dá)的動(dòng)態(tài)改變,并從高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)途徑和ROS途徑探討AE2表達(dá)的機(jī)制。方法:在培養(yǎng)的HUVECs中,分別加入含不同濃度的葡萄糖(GLU,5.5Mm, 17.8mM, 35.6mM, 71.2mM, 142.4mM)和甘露醇(MNT,142.4mM)的DMEM(pH=7.4)孵育48h;另取一批細(xì)胞,用含35.6 mM葡萄糖的DMEM分別孵育12h、24h、48h、72h、5d和7d后,收集細(xì)胞,采用RT-PCR和Western Blotting法分別檢測AE2 mRNA和AE2蛋白的表達(dá)的動(dòng)態(tài)改變。在機(jī)制研究中,在35.6 mM葡萄糖溶液中分別加入AGEs形成抑制劑(AG,終濃度為5mM)和ROS生成抑制劑(MTZ,終濃度為1μM)處理細(xì)胞48h,檢測AE2 mRNA和AE2蛋白的表達(dá)改變及采用EMSA法測定相應(yīng)的各組AP1的DNA結(jié)合活性。結(jié)果:(1)MTT法檢測細(xì)胞活力:與Control組比,葡萄糖濃度越高,細(xì)胞活力越低,相同葡萄糖濃度下培養(yǎng)時(shí)間越長細(xì)胞活力越低。MNT組與Control組比較,無顯著性差異(P 0.05)。(2)高糖(HG)誘導(dǎo)AE2 mRNA和蛋白表達(dá)的濃度-效應(yīng)關(guān)系:AE2 mRNA表達(dá)水平先隨著葡萄糖濃度增加而增加,在35.6 mM和71.2mM達(dá)到最大,分別為5.5mM時(shí)的2.25和2.30倍(P 0.01,vs 5.5mM),在142.4mM時(shí),AE2 mRNA表達(dá)量降低,為5.5mM時(shí)的1.98倍(P 0.05,vs 5.5mM),而142.4mM MNT對(duì)AE2 mRNA表達(dá)無影響(P 0.05,vs 5.5mM)。AE2蛋白表達(dá)的改變與AE2mRNA表達(dá)變化類似。(3)HG誘導(dǎo)AE2 mRNA和蛋白表達(dá)的時(shí)間過程:隨著35.6 mM GLU處理時(shí)間的延長,AE2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平也隨之增加,48h達(dá)到最大,隨后表達(dá)量降低,到168h還維持較高水平(P 0.01,或P 0.05,vs 0 h)。(4)抑制AGEs和ROS途徑可下調(diào)高糖誘導(dǎo)的AE2 mRNA和蛋白的表達(dá):HG(35.6 mM)可上調(diào)AE2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,與Control(5.5 mM)相比,具有顯著性差異(P 0.01);AG(5 mM)和MTZ(1μM)分別與GLU(35.6 mM)共孵育48 h, AE2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平顯著降低(P 0.05,vs HG),但與Control(5.5 mM)相比,無顯著性差異(P 0.05)。(5)HG對(duì)AP-1與AE2基因啟動(dòng)子特異序列結(jié)合活性的影響:HG(35.6 mM)可明顯促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白AP1與AE2基因啟動(dòng)子中特異序列結(jié)合,而AG(5 mM)和MTZ(1μM)明顯對(duì)抗HG誘導(dǎo)的AP1結(jié)合活性的升高。結(jié)論:高糖以時(shí)間和濃度依賴方式上調(diào)AE2 mRNA和蛋白的表達(dá);其機(jī)制是HG通過AGEs與ROS依賴途徑活化轉(zhuǎn)錄因子AP1,從而上調(diào)AE2 mRNA和蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1348596