本文關(guān)鍵詞：骨髓源性心肌干細(xì)胞的年齡性變化以及IGF-1對(duì)干細(xì)胞衰老的調(diào)節(jié)作用　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的研究不同年齡大鼠MCSCs超微結(jié)構(gòu)和衰老相關(guān)指標(biāo)的差異,明確年齡因素對(duì)MCSCs增殖、存活和向心肌細(xì)胞分化的影響,探討IGF-1對(duì)干細(xì)胞衰老的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。方法從幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中分離MMSCs,通過(guò)單克隆培養(yǎng)技術(shù)、c-kit免疫熒光標(biāo)記和RT-PCR檢測(cè)心肌早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5的表達(dá),從MMSCs中篩選出具有心肌特異分化潛能的MCSCs。透射電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。SA-β-半乳糖苷酶染色和ROS染色檢測(cè)細(xì)胞衰老變化,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期。建立體外無(wú)血清缺氧模型,Annexin V/PI雙標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)和Hochest 33342染色檢測(cè)MCSCs存活和凋亡。用BMP-2誘導(dǎo)不同年齡組MCSCs向心肌細(xì)胞分化,RT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞心肌早期轉(zhuǎn)錄因子和心肌特異基因的表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)各年齡組細(xì)胞經(jīng)BMP-2誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)cTnT表達(dá)的變化。用IGF-1處理老年組MCSCs,SA-β-半乳糖苷酶染色和ROS染色檢測(cè)細(xì)胞衰老指標(biāo)差異,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。Hochest 33342染色檢測(cè)IGF-1處理前后,老年組MCSCs在無(wú)血清缺氧培養(yǎng)條件下凋亡細(xì)胞比例。用BMP-2誘導(dǎo)各實(shí)驗(yàn)組MCSCs向心肌細(xì)胞定向分化,RT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)cTnT表達(dá)的變化。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)IGF-1處理前后細(xì)胞中p53、p21和bax mRNA的表達(dá)變化以及細(xì)胞VEGF、HGF和FGF mRNA的表達(dá)差異。結(jié)果從MMSCs克隆中篩選出表達(dá)心肌早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5的c-kit~+MMSCs克隆。透射電鏡顯示老年組MCSCs核漿比減小,胞漿內(nèi)髓樣小體增多。隨著年齡增長(zhǎng),處于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多。在無(wú)血清缺氧條件下培養(yǎng)12h后,老年組凋亡細(xì)胞比例明顯高于幼年組。用BMP-2誘導(dǎo)后4周,幼年組細(xì)胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表達(dá)明顯,成年組和老年組細(xì)胞表達(dá)低于幼年組,差異有顯著性意義。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,BMP-2誘導(dǎo)后幼年組細(xì)胞cTnT表達(dá)明顯,老年組細(xì)胞表達(dá)較弱。老年組MCSCs經(jīng)IGF-1處理后,β-半乳糖苷酶陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和ROS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少,處于增殖期的細(xì)胞比例明顯增高。在無(wú)血清缺氧條件下培養(yǎng)12h后,老年IGF-1處理組MCSCs凋亡細(xì)胞比例較未處理組下降,差異有顯著性意義。用BMP-2誘導(dǎo)后4周,老年IGF-1處理組細(xì)胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表達(dá)較未處理組增強(qiáng)。經(jīng)IGF-1處理后,老年組MCSCs的p53、p21和bax mRNA表達(dá)下調(diào),VEGF、HGF和FGFmRNA表達(dá)上調(diào)。結(jié)論隨著年齡增長(zhǎng),MCSCs發(fā)生衰老變化,其增殖、存活和向心肌細(xì)胞分化能力下降。IGF-1能在一定程度上抑制MCSCs衰老并提高其增殖、存活和向心肌細(xì)胞分化的能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1348186