本文關(guān)鍵詞：腺病毒介導(dǎo)PPAR-γ1基因腦室內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠缺血再灌注腦的保護(hù)作用及機(jī)制　出處：《中南大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的：研究缺血再灌注大鼠腦組織PPAR-γ1mRNA和蛋白的表達(dá)變化,并結(jié)合文獻(xiàn)分析其和腦缺血再灌注損傷的關(guān)系。 方法：建立SD大鼠右側(cè)MCAO缺血再灌注模型。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、假手術(shù)組和缺血再灌注組。缺血再灌注組取缺血后12h、24h和48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察。用RT-PCR方法及Western blotting方法分別檢測PPAR-γ1mRNA和蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：腦缺血再灌注組PPAR-γ1mRNA和蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組和假手術(shù)組明顯降低。通過對(duì)缺血后12h、24h和48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)變化觀察發(fā)現(xiàn),缺血后12h表達(dá)最低,并且隨缺血后時(shí)間的推移,其表達(dá)逐漸增加,存在顯著性差異。但缺血后48h的表達(dá)值仍低于正常對(duì)照組和假手術(shù)組。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)SD大鼠缺血再灌注腦組織PPAR-γ1表達(dá)下調(diào),提示針對(duì)PPAR-γ1作為一靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)對(duì)于缺血性腦血管病的治療是一個(gè)新的研究方向。 目的：1.研究通過腦室內(nèi)途徑腺病毒載體轉(zhuǎn)染PPAR-γ1到腦的可行性,如果可行則進(jìn)一步觀察其對(duì)缺血再灌注腦是否具有保護(hù)作用。 2.過表達(dá)PPAR-γ1基因和PPAR-γ激活劑吡格列酮合用,觀察其對(duì)腦I/R保護(hù)作用是否有增強(qiáng)。 3.研究PPAR-γ1對(duì)IL-1β、ICAM-1、Bcl-2、Bax、MMP-9和AQP-4的影響及抗腦I/R損傷的機(jī)制。 方法：(1)構(gòu)建復(fù)制缺陷性重組腺病毒：采用分子克隆手段獲得攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的重組質(zhì)粒、攜帶PPAR-γ1基因的重組質(zhì)粒,以細(xì)胞內(nèi)同源重組法構(gòu)建復(fù)制缺陷型重組腺病毒Adv-EGFP、Adv-PPAR-γ1,在293細(xì)胞內(nèi)分別擴(kuò)增,應(yīng)用氯化銫密度梯度離心法純化病毒。 (2)選擇95只SD大鼠隨機(jī)分成6組。按照包新民等報(bào)道的定位方法,在立體定位儀下給大鼠腦室內(nèi)注射相應(yīng)試劑0.1ml。第1、2組注入不含PPAR-γ1基因的生理鹽水0.1ml,第3組注入Adv-PPARγ1 0.1ml,第4注入Adv-EGFP 0.1ml,第5組吡格列酮5mg/kg灌胃Qd×3天,第6組腦室內(nèi)注入Adv-PPARγ1 0.1ml+吡格列酮5mg/kg灌胃Qd×3天。 (3)3天后建立大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型。第1組為假手術(shù)組,不阻斷大鼠大腦中動(dòng)脈。第2-6組阻斷大腦中動(dòng)脈90分鐘再灌注24小時(shí)。 (4)采集腦組織標(biāo)本,采用TTC染色法測量腦梗死體積；伊文氏藍(lán)法測定血腦屏障通透性；干-濕重法測定腦含水量；光鏡、電鏡下進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察,免疫熒光顯微鏡下觀察腺病毒表達(dá)情況；腦組織MPO活性測定；用Western Blot方法檢測缺血區(qū)腦組織IL-1β、ICAM-1、Bcl-2、Bax、AQP-4、MMP-9蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：腦室內(nèi)途徑腺病毒載體轉(zhuǎn)染Adv-EGFP,免疫熒光反應(yīng)陽性。腦缺血再灌注后,腦梗死體積增大、血腦屏障通透性增加、腦組織含水量增加、MPO活性明顯增高,IL-1β、ICAM-1、Bax、AQP-4和MMP-9蛋白的表達(dá)增加,Bcl-2蛋白表達(dá)減少。腦室內(nèi)注射Adv-PPARγ1或吡格列酮灌胃均能抑制以上腦損傷指標(biāo)以及IL-1β、ICAM-1、Bax、AQP-4和MMP-9的蛋白表達(dá)上調(diào),而使Bcl-2蛋白表達(dá)增加。它們聯(lián)合應(yīng)用時(shí)能增強(qiáng)保護(hù)作用。 結(jié)論：1.通過腦室內(nèi)注射腺病毒載體轉(zhuǎn)染PPAR-γ1到腦的方法可行,且對(duì)缺血再灌注腦具有保護(hù)作用。 2.腦室內(nèi)轉(zhuǎn)染PPAR-γ1基因和PPAR-γ激活劑吡格列酮合用,能增強(qiáng)對(duì)I/R腦的保護(hù)作用。 3.PPAR-γ1可以減少缺血再灌注腦組織中性粒細(xì)胞的浸潤,同時(shí)抑制IL-1β、ICAM-1、Bax、MMP-9、AQP-4上調(diào),促進(jìn)Bcl-2上調(diào)。提示PPAR-γ1是通過調(diào)控炎性損傷路徑發(fā)揮抗缺血再灌注損傷的,并且提示抑制凋亡也可能是其機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective: To study the changes in the expression of PPAR- gamma 1mRNA and protein in cerebral tissue of rats with ischemia reperfusion, and to analyze the relationship with cerebral ischemia reperfusion injury in the literature.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1345467