本文關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《浙江大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的分離、培養(yǎng)、凍存人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs),并檢測(cè)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能否在體外誘導(dǎo)分化為肝樣細(xì)胞。 方法利用Ficoll密度梯度離心法與貼壁法相結(jié)合,分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增人MSCs,將第3-5代人MSCs用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志;在成骨細(xì)胞誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)下向成骨細(xì)胞分化,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,并檢測(cè)堿性磷酸酶(AKP)染色;并在肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF-4)的誘導(dǎo)下定向分化為肝樣細(xì)胞,觀察其形態(tài)學(xué)變化,進(jìn)行PAS染色檢測(cè)糖原,并通過(guò)RT-PCR、免疫熒光反應(yīng)檢測(cè)肝樣細(xì)胞的特異標(biāo)志物ALB、CK18、AFP,鑒定誘導(dǎo)細(xì)胞的性質(zhì)。 結(jié)果體外分離、培養(yǎng)出的hMSCs呈成纖維樣細(xì)胞,形態(tài)均一,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,第3-5代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞用流式細(xì)胞儀檢測(cè)高表達(dá)表面CD29 CD105,不表達(dá)CD34。經(jīng)凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差別,均呈典型的梭形;hMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)3周后,行堿性磷酸酶染色陽(yáng)性。加入HGF、FGF4等細(xì)胞因子進(jìn)行肝細(xì)胞誘導(dǎo)后,細(xì)胞形態(tài)由紡錘形漸轉(zhuǎn)為小圓形,與肝細(xì)胞相似;培養(yǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞用免疫熒光法及RT-PCR法檢測(cè)陽(yáng)性,并糖原染色呈現(xiàn)陽(yáng)性。 結(jié)論培養(yǎng)擴(kuò)增的人MScs具有均一的形態(tài),經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè),細(xì)胞純度較高;經(jīng)短期凍存復(fù)蘇后,仍具較高的活性和增殖能力;在成骨細(xì)胞誘導(dǎo)液的誘導(dǎo)下,能向成骨細(xì)胞分化;在HGF及FGF-4的作用下,可成功向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化,分化的細(xì)胞表達(dá)肝細(xì)胞表面標(biāo)志物ALB、AFP、CK18,并PAS染色陽(yáng)性,故hMSCs有可能作為肝組織工程的種子細(xì)胞來(lái)源。
[Abstract]:Objective to isolate, culture and freeze human bone marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) and determine whether human bone marrow mesenchymal stem cells can be induced to differentiate into hepatocyte like cells in vitro.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 代飛,吳軍,許建中,王序全,尹芝華;兩種從骨髓中分離人間充質(zhì)干細(xì)胞方法的比較研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年16期

2 ;Hepatic differentiation capability of rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年19期

3 ;Bone marrow-derived mesenchymal stem cells protect against experimental liver fibrosis in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2005年22期

4 ;Rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiate into hepatocytes in vitro[J];World Journal of Gastroenterology;2005年22期

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本文編號(hào)：1345274