本文關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及向肝樣細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究　出處：《浙江大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的分離、培養(yǎng)、凍存人骨髓間充質(zhì)干細胞(hMSCs),并檢測人骨髓間充質(zhì)干細胞能否在體外誘導(dǎo)分化為肝樣細胞。 方法利用Ficoll密度梯度離心法與貼壁法相結(jié)合,分離、培養(yǎng)、擴增人MSCs,將第3-5代人MSCs用流式細胞儀檢測其細胞表面標(biāo)志;在成骨細胞誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)下向成骨細胞分化,觀察細胞形態(tài)學(xué)變化,并檢測堿性磷酸酶(AKP)染色;并在肝細胞生長因子(HGF)及成纖維細胞生長因子(FGF-4)的誘導(dǎo)下定向分化為肝樣細胞,觀察其形態(tài)學(xué)變化,進行PAS染色檢測糖原,并通過RT-PCR、免疫熒光反應(yīng)檢測肝樣細胞的特異標(biāo)志物ALB、CK18、AFP,鑒定誘導(dǎo)細胞的性質(zhì)。 結(jié)果體外分離、培養(yǎng)出的hMSCs呈成纖維樣細胞,形態(tài)均一,生長狀態(tài)良好,第3-5代人骨髓間充質(zhì)干細胞用流式細胞儀檢測高表達表面CD29 CD105,不表達CD34。經(jīng)凍存復(fù)蘇后,細胞形態(tài)無明顯差別,均呈典型的梭形;hMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)3周后,行堿性磷酸酶染色陽性。加入HGF、FGF4等細胞因子進行肝細胞誘導(dǎo)后,細胞形態(tài)由紡錘形漸轉(zhuǎn)為小圓形,與肝細胞相似;培養(yǎng)誘導(dǎo)的細胞用免疫熒光法及RT-PCR法檢測陽性,并糖原染色呈現(xiàn)陽性。 結(jié)論培養(yǎng)擴增的人MScs具有均一的形態(tài),經(jīng)流式細胞儀檢測,細胞純度較高;經(jīng)短期凍存復(fù)蘇后,仍具較高的活性和增殖能力;在成骨細胞誘導(dǎo)液的誘導(dǎo)下,能向成骨細胞分化;在HGF及FGF-4的作用下,可成功向肝細胞誘導(dǎo)分化,分化的細胞表達肝細胞表面標(biāo)志物ALB、AFP、CK18,并PAS染色陽性,故hMSCs有可能作為肝組織工程的種子細胞來源。
[Abstract]:Objective to isolate, culture and freeze human bone marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) and determine whether human bone marrow mesenchymal stem cells can be induced to differentiate into hepatocyte like cells in vitro.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 代飛,吳軍,許建中,王序全,尹芝華;兩種從骨髓中分離人間充質(zhì)干細胞方法的比較研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年16期

2 ;Hepatic differentiation capability of rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年19期

3 ;Bone marrow-derived mesenchymal stem cells protect against experimental liver fibrosis in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2005年22期

4 ;Rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiate into hepatocytes in vitro[J];World Journal of Gastroenterology;2005年22期

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本文編號：1345274