本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒E蛋白抗原表位的結(jié)構(gòu)分析　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 乙型腦炎(Japanese encephalitis, JE )是由黃病毒科黃病毒屬成員日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus ,JEV)引起的一種嚴(yán)重危害人畜健康的蟲(chóng)媒病毒性疾病。囊膜糖蛋白E是JEV的主要結(jié)構(gòu)蛋白,在病毒的吸附、融合、血凝、細(xì)胞趨向性、病毒毒力和誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)中起重要作用。本研究參照SA14-14-2序列,對(duì)實(shí)驗(yàn)室已鑒定出的6個(gè)抗原表位(E1、E11、E19、E33、E39、E49)分別從羧基端(C端)和氨基端(N端)進(jìn)行逐個(gè)氨基酸的縮短,設(shè)計(jì)一系列短肽和與之對(duì)應(yīng)的寡核苷酸鏈,退火后插入表達(dá)載體pGEX-6p-1,與GST進(jìn)行融合表達(dá),用JEV陽(yáng)性血清進(jìn)行Western blot分析,確定出六個(gè)抗原表位的核心序列: E1(~7GNRDFIEG~(14))、E11(~(72)EKRADSS~(89))、E19(~(150)ENHGNYS~(156))、E33(~(259)EGGLHHA~(265))、E39(~(310)FAKNPVD~(316))和E49(~(385)VGRGDK~(390))。其中, E19抗原表位( ~(150)ENHGNYS~(156))完全包含于報(bào)道的線性中和表位(~(149)SENHGNYSAQVGASQ~(163)),因此推測(cè)E19抗原表位為具有中和活性的表位。 黃病毒屬(Flavivirus)是黃病毒科(Flaviviridae)的最大家族,分為8個(gè)血清學(xué)亞群,包括70多種具有血清交叉反應(yīng)特性的不同病毒,如:流行性乙型腦炎、登革熱病毒(Dengue fever virus,DV)、西尼羅病毒(West Nile virus, WNV)和昆津病毒(Kunjin virus,KUNV)。這些病毒均能引起發(fā)熱、腦炎等相似的臨床癥狀,但目前卻沒(méi)有成熟的鑒別診斷方法。本實(shí)驗(yàn)把E1、E10、E11、E19、E33、E39和E49七個(gè)抗原表位的核心序列與24條乙型腦炎不同病毒株和12條黃病毒屬病毒不同代表株的同源序列用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行了比較和分析,共設(shè)計(jì)47條突變短肽,進(jìn)行GST融合表達(dá)后用免疫印跡的方法,初步確定了E1、E10、E19和E33四個(gè)抗原表位具有鑒別診斷乙型腦炎病毒與部分其他黃病毒屬病毒感染的意義。 本研究將為進(jìn)一步分析E蛋白結(jié)構(gòu)和功能、新型表位肽疫苗的研制以及建立乙型腦炎臨床鑒別診斷方法奠定分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Japanese encephalitis (Japanese encephalitis JE) is a flavivirus member of Japanese encephalitis virus (Japanese encephalitis, virus, JEV) caused a serious harm to human and animal health arbovirus diseases. Envelope glycoprotein E is the major structural protein of JEV. It plays an important role in viral adsorption, fusion, hemagglutination, cell tropism, virulence and induced protective immunity. This study according to the SA14-14-2 sequence, the laboratory has identified 6 epitopes (E1, E11, E19, E33, E39, E49) respectively from the carboxyl terminal (C terminal) and amino terminal (N terminal) to shorten one by one amino acid, design a series of short peptides and the corresponding oligonucleotides. The expression vector pGEX-6p-1 is inserted after annealing, were fused with the expression of GST, Western blot analysis with JEV positive serum, determine the core sequence of the six epitopes: E1 (~7GNRDFIEG~ (14)), E11 (~ (72) EKRADSS~ (89)), E19 (~ (150) ENHGNYS~ (156)) E33, (~ (259) EGGLHHA~ (265)), E39 (~ (310) FAKNPVD~ (316)) and E49 (~ (385) VGRGDK~ (390)). Among them, the epitope of E19 (~ (150) ENHGNYS~ (156)) is completely contained in the reported linear neutralization epitope (~ (149) SENHGNYSAQVGASQ~ (163)). Therefore, we speculate that E19 epitope is a neutralizing epitope.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

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1 戚龍霞;乙型腦炎病毒E蛋白在桿狀病毒表面的展示及其免疫原性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

2 魯蘇娜;淄博、洛陽(yáng)兩地乙型腦炎病毒檢測(cè)及病毒性腦炎其它病原篩查[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1344947