本文關鍵詞：人谷胱甘肽過氧化物酶-7原核表達、純化及功能研究　出處：《上海交通大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：谷胱甘肽過氧化物酶7(Glutathione peroxidase7，GPx7)的體外GPx活性較低，但其在細胞內(nèi)發(fā)揮著獨特的生理活性。利用原核細胞表達人源GPx7，使其在細胞外針對ROS而發(fā)揮的抑制腫瘤增殖和促進骨髓損傷的修復作用是一個新穎的、值得研究的問題。本論文研究了GPx7原核表達載體的構建、原核細胞表達、蛋白純化、抑制腫瘤細胞增殖和對小鼠化療藥物骨髓損傷的再生的影響，，以及細胞內(nèi)外的抗氧化活性。 人源GPx7基因片段重組入原核表達質(zhì)粒pET24a，成功構建原核表達質(zhì)粒pET24a-GPx7，在大腸桿菌宿主BL21(DE3)中經(jīng)誘導以可溶形式表達。初步建立了Sulfopropyl陽離子交換和Superdex75分子排阻2步層析法純化E.coli BL21(DE3)表達的GPx7，SDS-PAGE電泳結果為單一條帶的蛋白質(zhì)經(jīng)Western blotting鑒定為GPx7。GPx7對腫瘤細胞生長具有一定的抑制作用。在A549腫瘤細胞中轉染真細胞表達質(zhì)粒pCDNA3.1(-)-GPx7，瞬時高表達的GPx7顯著抑制腫瘤細胞的體外增殖(p0.05)。GPx7對S180荷瘤小鼠的腫瘤抑制率為29.26%。GPx7能緩解化療藥物5-FU對骨髓細胞的氧化應激損傷，在5-FU化療藥物骨髓損傷模型小鼠中，注射GPx7后在第9、11、13天能顯著促進骨髓損傷小鼠的骨髓細胞再生(p0.05)，最終顯著增加損傷小鼠外周血白細胞和血小板的數(shù)量。過表達GPx7的肺癌細胞A549增殖受到抑制，同時細胞內(nèi)ROS顯著下降(p0.05)，提示GPx7通過調(diào)控ROS以干擾腫瘤細胞的增殖。
[Abstract]:The GPx activity of glutathione peroxidase 7 (Glutathione peroxidase7, GPx7) in vitro is low, but it plays a unique physiological activity in the cell. The use of prokaryotic cells to express human GPx7 and make it play an important role in inhibiting ROS proliferation and promoting bone marrow repair in vitro is a new and worthwhile problem. In this paper, we studied the construction of prokaryotic expression vector GPx7, prokaryotic cell expression, protein purification, inhibition of tumor cell proliferation and regeneration of bone marrow injury of chemotherapeutic drugs in mice, and the antioxidant activity of cells.
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R3411

【參考文獻】

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1 毛文偉;王曉;何慧娟;沈娟;俞眉;杜麗娟;張忠輝;朱順英;吳明媛;路慧麗;王群;韓偉;;體內(nèi)表達谷胱甘肽過氧化物酶-7基因對骨髓抑制的防護作用研究[J];中國醫(yī)藥生物技術;2008年04期

本文編號：1340239