本文關鍵詞：熒光納米粒子DNA探針與核酸適配體篩選　出處：《蘇州大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：本文第一部分就聚電解質(zhì)對水溶性量子點CdTe的熒光保護作用以及量子點在核酸檢測中的應用作了相關研究。首先，采用靜電吸附的方法合成了聚電解質(zhì)保護的量子點-聚二烯丙基二甲基氯化銨（QDs-PDADMAC）納米復合物。該納米復合物呈現(xiàn)出卷曲的、長度不一的“柔性條帶”狀，條帶寬度約3-5nm。在聚電解質(zhì)PDADMAC的保護下，量子點的熒光量子產(chǎn)率不但沒有降低，且有效地防止了表面巰基類配體的脫落，進而比量子點本身具有更明顯的時間穩(wěn)定性以及抗酸、堿、氧化的穩(wěn)定性，與此同時，還保持了量子點的生物兼容性。 我們利用靜電吸附作用將單鏈核酸探針固定在QDs-PDADMAC納米復合物條帶的表面，制備了探針DNA/QDs-PDADMAC納米復合物，以此作為能量供體，并以溴化乙錠（EB）標記的dsDNA作為能量受體，建立了一種基于熒光共振能量轉移（FRET）的DNA檢測方法。與傳統(tǒng)的運用化學鍵共價結合作用將核酸探針固定在納米粒表面制備熒光納米探針的方法相比，此方法更加簡單，快速。對FRET體系中探針DNA的濃度、EB濃度，NaCl濃度進行了優(yōu)化，得到最佳檢測條件。在優(yōu)化條件下對DNA進行濃度檢測，方法表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性，信號穩(wěn)定，得到的定量限為7.7nM，線性范圍為7.7-61.6nM，且線性關系良好。本方法簡單、靈敏，同時實現(xiàn)了無標記的DNA檢測。 現(xiàn)代分子醫(yī)學需要大量的探針用于識別和表征各種不同的癌細胞。適配體是一種單鏈DNA/RNA探針，具有與抗體類似的性質(zhì)，將作為分子探針廣泛的應用于在生物醫(yī)學領域的應用。本文通過基于細胞的指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術（cell-SELEX），對完整的活細胞進行適配體篩選，對PCR條件、非特異性結合、篩選壓力的調(diào)節(jié)等過程不斷優(yōu)化，在初始隨機DNA文庫中初步篩選出了對HL-60細胞特異性結合的適配體。HL-60細胞是急性早幼粒細胞白血病細胞，將其作為靶細胞對文庫進行篩選，K562細胞為慢性粒細胞白血病細胞，作為對照細胞進行負篩，以增加適配體的特異性。以細胞為基礎的SELEX技術篩選適配體簡單，，快速且穩(wěn)健。這種方法可以對復雜的目標樣本進行適配體篩選，以產(chǎn)生大量的核酸適配體應用于生物醫(yī)學和生物技術領域，為分子診斷，治療和生物標志物的發(fā)現(xiàn)鋪平了道路。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R3416

【參考文獻】

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本文編號：1323639