本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞加重血管鈣化的機制研究　出處：《華中科技大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 血管鈣化 Ror2 MSC 血管鈣化 直接共培養(yǎng) Wnt5a/Ror2信號通路

【摘要】：第一部分動脈組織體外調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究 目的：研究血管中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同鈣化環(huán)境中的分化情況。 方法：應(yīng)用華法林，維生素K1及維生素D3制作血管鈣化模型。造模成功后，分別取正常SD大鼠動脈和大鼠鈣化動脈與MSC共培養(yǎng)，實驗分為3組：正常組為正常動脈+MSC；鈣化誘導(dǎo)劑組為鈣化誘導(dǎo)劑+正常動脈+MSC；鈣化組為鈣化動脈+MSC。各組均培養(yǎng)3周，實驗第10天時采用ELISA法檢測OPG蛋白分泌情況，，3周后倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化，ELISA法檢測總蛋白含量和堿性磷酸酶（ALP）活性，Real-time PCR法檢測各組Ror2mRNA表達(dá)。 結(jié)果：鈣化組中MSC自發(fā)增殖向成骨樣細(xì)胞分化。與正常組相比，鈣化組中總蛋白含量、骨代謝標(biāo)志物ALP活性、骨保護(hù)素OPG均明顯升高，而Ror2mRNA表達(dá)則顯著低于正常組。鈣化誘導(dǎo)劑組中MSC未向成骨樣細(xì)胞分化，與正常組相比，ALP活性無明顯差異，但總蛋白含量及OPG均升高，Ror2mRNA表達(dá)則低于正常組。其中，鈣化組Ror2mRNA表達(dá)明顯低于鈣化誘導(dǎo)劑組。 結(jié)論：在已鈣化血管中，MSC向成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，加重血管鈣化；而當(dāng)血管尚未發(fā)生鈣化時，鈣化誘導(dǎo)劑不能誘導(dǎo)MSC向成骨樣細(xì)胞分化，而是向平滑肌細(xì)胞分化，修復(fù)血管，這可能與Ror2mRNA表達(dá)不同有關(guān)。 第二部分血管平滑肌細(xì)胞體外調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究 目的：研究MSC分別與正常平滑肌細(xì)胞和鈣化平滑肌細(xì)胞直接共培養(yǎng)時的分化情況。 方法：將MSC分別與鈣化平滑肌細(xì)胞和正常平滑肌細(xì)胞按不同比例共培養(yǎng)于六孔板中，具體比例如下：SMC15×104或鈣化SMC15×104； SMC10×104或鈣化SMC10×104： MSC5×104； SMC5×104或鈣化SMC5×104：MSC10×104。共培養(yǎng)9天，9天后細(xì)胞融合長滿六孔板。采用ELISA法和AKP染色法檢測成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶ALP，Western blot法檢測各組WNT5a的表達(dá)，Real-time PCR法檢測各組Ror2mRNA表達(dá)。 結(jié)果：CS15組、CS5M10組、CS10M5組的ALP活性以及WNT5a的表達(dá)均明顯高于S15組、S5M10+OS組、S10M5+OS組(P0.001)，相反，Ror2mRNA表達(dá)則明顯低于S15組、S5M10+OS組、S10M5+OS組(P0.001)。 結(jié)論：MSC分別與正常平滑肌細(xì)胞和鈣化平滑肌細(xì)胞直接共培養(yǎng)時可以分成不同類型的細(xì)胞，且與MSC的數(shù)量成正比。此外，Wnt5a/Ror2信號通路可能在MSC的分化中起著重要作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

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本文編號：1309607