本文關(guān)鍵詞：小鼠胸腺微環(huán)境對(duì)外源性抗原的免疫應(yīng)答

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【摘要】：研究背景與目的 胸腺對(duì)異種抗原細(xì)胞發(fā)生的免疫排斥現(xiàn)象,是在前期研究胸腺耐受的研究發(fā)現(xiàn)的。迄今為止,普遍的理論認(rèn)為胸腺是一個(gè)免疫“特赦”器官。T細(xì)胞前期在胸腺內(nèi)的發(fā)育和分化是一個(gè)抗原非依賴(lài)階段,此時(shí)接觸抗原易發(fā)生凋亡或耐受,當(dāng)其成熟后即遷移至外周的免疫器官,在抗原誘導(dǎo)下產(chǎn)生免疫應(yīng)答。因此對(duì)胸腺內(nèi)可能發(fā)生的免疫機(jī)制未能受到關(guān)注。 根據(jù)傳統(tǒng)的誘導(dǎo)性中樞耐受的理論機(jī)制,如果T細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中在胸腺內(nèi)接觸到異基因的抗原,則會(huì)被誘導(dǎo)出對(duì)該異基因外周移植物的耐受,同時(shí),血-胸腺屏障使血液中的大分子物質(zhì)包括外來(lái)抗原不能進(jìn)入胸腺,所以胸腺內(nèi)注射異基因抗原可以躲過(guò)免疫監(jiān)視,誘導(dǎo)出對(duì)異基因供體耐受的T細(xì)胞。為更好的研究異種抗原在機(jī)體內(nèi)的生物學(xué)特性及機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受和免疫排斥情況,我們將人肝癌細(xì)胞Hep-3B注射到10-15天的C57BL/6小鼠的胸腺中,人肝癌細(xì)胞Hep-3B作為異種不同組織的、MHC差異較大的抗原,觀察異種抗原在小鼠胸腺內(nèi)的命運(yùn)及對(duì)胸腺微環(huán)境的影響。 研究方法 1.胸腺內(nèi)注射異種抗原后對(duì)胸腺重量及細(xì)胞數(shù)量的影響 1) Hep-3B人肝癌細(xì)胞的傳代； 2)DiI染色標(biāo)記； 3)小鼠胸腺內(nèi)注射細(xì)胞； 4)小鼠胸腺組織稱(chēng)重及胸腺細(xì)胞絕對(duì)值計(jì)數(shù)； 2.FCM分析小鼠胸腺內(nèi)CD4CD8T細(xì)胞亞群的變化 1)小鼠胸腺內(nèi)注射； 2) FCM分析胸腺內(nèi)T細(xì)胞表面的CD4/CD8的比例變化； 3.胸腺注射異種抗原后組織切片分析 1)小鼠胸腺內(nèi)注射； 2)石蠟切片的制作； 3) HE染色觀察； 研究結(jié)果 第一部分 DiI染色觀察 Hep-3B人肝癌細(xì)胞在含有20微克/毫升DiI的基本培養(yǎng)基中標(biāo)記30min后,細(xì)胞標(biāo)記成功,并發(fā)射出強(qiáng)烈的紅色熒光。 胸腺重量及胸腺總數(shù)的變化 注射之后的實(shí)驗(yàn)組的C57BL/6小鼠胸腺的重量一直持續(xù)上升,與對(duì)照組相比,14天和21天的時(shí)候,重量差距較為明顯,相對(duì)于胸腺重量的增加,7天,14天,21天的時(shí)候小鼠的胸腺細(xì)胞的數(shù)量卻減少。 第二部分 FCM分析小鼠胸腺內(nèi)CD4CD8T細(xì)胞亞群的變化 注射后7天和21天的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組對(duì)比,雙陽(yáng)性的CD4CD8有明顯的減少,單陽(yáng)性CD4和單陽(yáng)性CD8、雙陰性CD4CD8均有很明顯的增高,特別是單陽(yáng)性的增加十分明顯,21天的對(duì)比,基本未有明顯的差別。 第三部分 胸腺注射異種抗原后組織切片分析 組織學(xué)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)胸腺內(nèi)注射后初期,人肝癌細(xì)胞完整,一些正在進(jìn)行有絲分裂,但隨著時(shí)間的推移,人肝癌細(xì)胞Hep-3B周?chē)_(kāi)始聚集大量的淋巴細(xì)胞,同時(shí),一些癌細(xì)胞開(kāi)始死亡,到達(dá)21天的時(shí)候,檢測(cè)不到癌細(xì)胞的存在,可以看到大量的鱗狀上皮細(xì)胞,這可能與胸腺的組織結(jié)構(gòu)重建有關(guān)。 人肝癌細(xì)胞在小鼠胸腺內(nèi)最終沒(méi)有逃脫免疫細(xì)胞的攻擊而發(fā)生死亡,腫瘤細(xì)胞及其殘骸可能存活時(shí)間長(zhǎng)達(dá)21天左右。 研究結(jié)論 1.注射異種抗原細(xì)胞之后,在小鼠胸腺內(nèi)被免疫細(xì)胞攻擊與清除的命運(yùn),并確定巨噬細(xì)胞及成熟的T淋巴都參與了異種抗原的免疫攻擊及清除。 2.注射異種抗原細(xì)胞,對(duì)小鼠胸腺內(nèi)T細(xì)胞發(fā)育及各類(lèi)細(xì)胞亞群比例均造成一定影響,CD4CD8雙陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著減小,CD4/CD8單陽(yáng)性細(xì)胞比例有所上升,但隨著異種抗原的免疫清除,各類(lèi)細(xì)胞亞群比例又恢復(fù)正常。 3.異種抗原細(xì)胞的注入,對(duì)小鼠胸腺組織造成一定的病理?yè)p傷,包括注射造成的胸腺組織機(jī)械損傷、胸腺細(xì)胞總數(shù)的減少及上皮細(xì)胞的嚴(yán)重增生、皮質(zhì)與髓質(zhì)比例的失衡等,但隨著異種抗原的免疫清除,這些組織病理學(xué)變化也逐漸消失,小鼠胸腺組織也恢復(fù)正常。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張?zhí)m芬,吳江聲,傅愛(ài)華,陳慰峰;胸腺微環(huán)境的研究——Ⅰ.人胎胸腺上皮網(wǎng)狀細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年01期

2 吳江聲,張?zhí)m芬,孫品偉,傅愛(ài)華,陳慰峰;小鼠胸腺基質(zhì)細(xì)胞的類(lèi)型和分布[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年01期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王黎黎;獼猴川西亞種下丘腦—免疫—生殖內(nèi)分泌軸組織學(xué)及ERα、ERβ、NOS1的表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 張國(guó)權(quán);不同濃度的碘對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞影響的形態(tài)學(xué)觀察[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

3 韓鈞凌;供體凋亡細(xì)胞輸注誘導(dǎo)胰島移植免疫耐受的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 王棟;小鼠胸腺對(duì)納米級(jí)化學(xué)異物與異種細(xì)胞的免疫應(yīng)答[D];山東大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1299148