本文關(guān)鍵詞：雪膽素甲對脂多糖活化的巨噬細胞RAW264.7的炎癥反應的影響及其機制研究

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【摘要】：目的： 分析雪膽素甲（cucurbitacin IIa, CuIIa）對脂多糖（LPS）誘導活化的巨噬細胞RAW264.7炎癥反應的影響，探討其潛在的抗炎效應及作用機制。方法： MTS法檢測CuIIa對小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞增殖的影響，Transwell法檢測CuIIa對巨噬細胞遷移的影響，SDS-聚丙酰胺凝膠電泳法檢測CuIIa對細胞內(nèi)骨架蛋白G-actin與F-actin的影響。細胞內(nèi)細胞因子染色法檢測CuIIa對LPS誘導活化的巨噬細胞炎癥細胞因子TNF-分泌的影響。相差顯微鏡觀察CuIIa對活化的巨噬細胞形態(tài)的影響，熒光顯微鏡觀察Hoechst33342染色細胞后細胞核的形態(tài)，流式細胞儀檢測細胞亞二倍體（凋亡）峰的變化，免疫印跡法檢測細胞內(nèi)MAPKs、NF-B、Caspase-3和LC3B-II相關(guān)蛋白的表達情況。熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)骨架蛋白Actin和自噬相關(guān)蛋白LC3B的分布。結(jié)果： CuIIa能明顯抑制巨噬細胞RAW264.7細胞的增殖，并呈時間和劑量依賴性。CuIIa能顯著抑制巨噬細胞遷移（P＜0.05）。CuIIa作用細胞后，能誘導細胞發(fā)生Actin聚集，細胞內(nèi)骨架蛋白G-actin聚集為F-actin聚集體。但是CuIIa并不能抑制LPS活化的巨噬細胞炎癥因子TNF-的分泌（P＞0.05）。同時CuIIa對LPS引起的細胞內(nèi)MAPKs和NF-B炎癥信號通路相關(guān)蛋白的活化作用均未有顯著影響。CuIIa使LPS活化的伸展細胞收縮變圓，偽足突起消失，細胞核內(nèi)染色質(zhì)固縮，細胞核碎裂，細胞內(nèi)發(fā)生嚴重的Actin聚集，說明微絲結(jié)構(gòu)被破壞。隨著CuIIa濃度的增加，其誘導LPS活化的RAW264.7細胞處于Sub-G0/G1（凋亡峰）的數(shù)量明顯增加，但其單獨作用于細胞不會有效誘導巨噬細胞發(fā)生凋亡。免疫印跡分析顯示，，這些效應是Caspase-3依賴的，并伴隨著survivin的下調(diào)。同時， CuIIa可以增強LPS誘導的RAW264.7細胞自噬，自噬相關(guān)蛋白LC3B-II顯著增加。熒光顯微鏡可以明顯觀察到LPS刺激后細胞內(nèi)LC3B聚集成點狀分布，CuIIa使這種點狀LC3B的數(shù)量明顯增加。結(jié)論： CuIIa能劑量依賴性抑制巨噬細胞RAW264.7細胞增殖與遷移，并誘導細胞內(nèi)肌動蛋白細胞骨架發(fā)生聚集。雖然CuIIa不能有效的抑制巨噬細胞炎癥細胞因子TNF-的分泌和炎癥信號通路蛋白的活化，但其可以有效的誘導活化的巨噬細胞發(fā)生凋亡與細胞自噬。這些可能是其發(fā)揮抗炎效應的作用機制之一。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 徐叔云,陳敏珠;抗炎免疫藥物臨床藥理的進展[J];中國臨床藥理學雜志;1986年01期

2 陳維新;聶瑞麟;陳毓群;夏克敏;;園果雪膽中雪膽甲素和雪膽乙素的結(jié)構(gòu)[J];化學學報;1975年01期

3 陳夏靜;伍怡穎;匡文娟;繆世坤;周黎明;;雪膽素片抗炎鎮(zhèn)咳作用的實驗研究[J];四川生理科學雜志;2009年04期

4 高申;于孟可;魏佳慧;劉百歌;;雪膽甲素對人非小細胞肺癌A549細胞增殖的抑制作用[J];中國生物制品學雜志;2012年01期

5 田仁榮;陳劍超;張高紅;邱明華;王云華;杜麗;沈旭;劉^

本文編號：1288944