本文關(guān)鍵詞：硫化氫對新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞釋放兒茶酚胺的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景 硫化氫(H2S)是一種重要的氣體信號分子,其對細(xì)胞膜上多種離子通道有調(diào)控作用。腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenal medulla chromaffin cells,AMCs)分泌的兒茶酚胺(catecholamine, CA)在應(yīng)激反應(yīng)中起到了至關(guān)重要的作用。CA參與出生階段呼吸與心血管調(diào)節(jié),幫助新生鼠適應(yīng)子宮外的環(huán)境。我們先前的研究揭示了H2S可以通過抑制鈣依賴型鉀通道[IK(Ca) current]引起大鼠AMCs分泌CA。然而,H2S是否能觸發(fā)NRACCs釋放兒茶酚胺CA尚不清楚。在我們的研究中,我們使用碳纖維電極(cabon fiber electrode, CFE)安培法和全細(xì)胞記錄膜片鉗技術(shù),探究了H2S能否引起新生鼠AMCs量子化釋放CA以及H2S引起的新生鼠和成年鼠嗜鉻細(xì)胞CA分泌的動力學(xué)差異。 材料和方法 實(shí)驗(yàn)選擇0到7天的新生鼠三只,取出一共六個(gè)腎上腺,立即放入D-hanks溶液中。剪除腎上腺皮質(zhì),然后把髓質(zhì)單獨(dú)放在D-Hanks溶液中。然后將溶液中的髓質(zhì)放入0.6ml混合酶液中(膠原酶I3mg/ml,牛血清白蛋白3mg/ml,DNA酶0.23mg/ml,透明質(zhì)酸酶2.4mg/ml)37℃恒溫消化20分鐘。消化后,用200μl移液器將髓質(zhì)吹散。最后,將細(xì)胞固定于蓋玻片(用PLL處理過)上然后加入DMEM高糖培養(yǎng)基中(含10%FBS),暫時(shí)放入37℃恒溫箱中。新生鼠的嗜鉻細(xì)胞需要在12小時(shí)內(nèi)使用。實(shí)驗(yàn)操作中,含有原代培養(yǎng)的細(xì)胞玻片需放入記錄皿中,并且以1ml/min的速度用標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞外液持續(xù)灌流。使用5微米的碳纖維電極檢測新生鼠兒茶酚胺的釋放。全細(xì)胞記錄使用膜片鉗放大器為Axon公司的700B型放大器,玻璃電極電阻為6-10MΩ。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,采用單因素方差分析比較多組間的差異,t檢驗(yàn)比較兩組間的差異,以P0.05為顯著性差異界值。 結(jié)果 1.外源性硫化氫可以觸發(fā)新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分泌兒茶酚胺。 2.外源性硫化氫通過抑制鈣依賴性鉀通道引起細(xì)胞膜去極化。 3.外源性硫化氫引起的新生鼠和成年鼠兒茶酚胺的量子釋放有動力學(xué)的差異。表現(xiàn)在通過單個(gè)囊泡的釋放,對比成年鼠而言,新生鼠的分泌量較少但是分泌速度較快。 結(jié)論 外源性的硫化氫可以直接引起新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞兒茶酚胺的量子化釋放。相比較成年鼠而言,動力學(xué)分析顯示新生鼠有較快的分泌時(shí)間和較少的分泌量。我們的研究結(jié)果提示硫化氫引起的新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞兒茶酚胺的釋放可能會幫助新生鼠耐受低氧應(yīng)激性的損傷。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R335

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1286862