發(fā)布時間：2017-12-09 11:15

  本文關(guān)鍵詞：血清肌鈣蛋白-Ⅰ均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測體系的初步建立

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【摘要】：急性心肌梗死(AMI)作為急性冠狀動脈綜合征(ACS)最嚴(yán)重的類型,是威脅人類健康的殺手,可致心源性猝死。根據(jù)心電圖的改變,可分為ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEMI):STEMI有特征性的心電圖改變,便于病人早發(fā)現(xiàn)、早治療,患者的預(yù)后較好；而NSTEMI沒有特征性的心電圖改變,此時心肌標(biāo)志物的檢測對NSTEMI早期診斷和治療顯得尤為重要。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)對心肌損傷具有高度的敏感性和特異性,已成為診斷AMI診斷首選心臟標(biāo)志物,并作為評價心肌壞死和診斷心肌梗死的“金標(biāo)準(zhǔn)”。 Tn1是心肌主要收縮蛋白的三個亞單位之一,是肌原纖維ATP酶的抑制性亞單位,分為3種亞型：快骨骼肌亞型(fTnI)、慢骨骼肌亞型(sTnI)和心肌亞型(cTnI)。心肌亞型與其他亞型有約40%的異源性,在氨基端延伸出一段31個氨基酸組成的序列,利用此特性,可提高cTnI診斷AMI的特異性和準(zhǔn)確性。cTnI經(jīng)歷了常規(guī)方法檢測到高敏感方法檢測幾代檢測方法的改進(jìn)和臨床應(yīng)用研究,高敏cTnI (hs-cTnI)在臨床上得到廣泛的認(rèn)同和應(yīng)用。本研究以魯米諾氧通道免疫分析技術(shù)(LOCI)為基礎(chǔ),建立一種新的檢測cTnI的定量方法,該方法具有靈敏度高、均相、免清洗、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。 目的： 以魯米諾氧通道免疫分析技術(shù)(LOCI)為基礎(chǔ),以AlphaScreen均相發(fā)光免疫分析技術(shù)為平臺,初步建立血清肌鈣蛋白-I (cTnI)均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測體系,并對其進(jìn)行方法學(xué)和臨床評價。 方法： 鼠抗人cTnI單克隆抗體、兔抗人cTnI多克隆抗體分別標(biāo)記受體微球、生物素,組成兩對抗體組合,采用棋盤滴定法確定較佳抗體組合；并利用棋盤滴定法確定標(biāo)記受體微球和生物素化抗體反應(yīng)的最適工作濃度,同時對實(shí)驗(yàn)不同階段反應(yīng)時間、試劑加樣順序、加樣比例以及方法的緩沖體系進(jìn)行了優(yōu)化。在優(yōu)化基礎(chǔ)上建立四參數(shù)擬合方程的校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線,測定未知濃度臨床標(biāo)本,得到其發(fā)光信號值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得出其相應(yīng)的cTnI濃度。根據(jù)上述方法對臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測并做方法學(xué)及臨床評價。研究中采用ELISA Calc軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 本法建立的測定cTnI均相免疫檢測體系是由兔抗人cTnI多克隆抗體包被受體微球、生物素標(biāo)記鼠抗人cTnI單克隆抗體及鏈霉親和素包被供體微球共同組成,該方法快速、敏感,檢測時間為17.5mmin；分析靈敏度為0.045ng/mL,功能靈敏度為0.053ng/mL;回收率為104.97%-108.12%；批內(nèi)精密度為3.88%-5.53%,批間精密度為7.60%-8.75%；特異性分析中溶血、黃疸及脂血的干擾率均10%；采用本方法檢測87例健康人cTnI含量,上限為1.05ng/mL;檢測40份臨床標(biāo)本結(jié)果與直接化學(xué)發(fā)光檢測法所得結(jié)果具有良好的相關(guān)性(r2=0.979),使用x2檢驗(yàn)及一致性分析推斷本試劑與直接化學(xué)發(fā)光檢測試劑無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： 本研究建立的方法能夠用于定量檢測血清cTnI,該方法具有均相、免清洗分離、靈敏度高,準(zhǔn)確性、重復(fù)性好,便于操作等優(yōu)點(diǎn),進(jìn)一步研究有望推廣臨床應(yīng)用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 趙金龍;管益國;李大鋒;;cTnI快速定量檢測在診斷非ST段抬高型急性心肌梗死中的應(yīng)用[J];放射免疫學(xué)雜志;2011年03期

3 肖勤;林金明;;化學(xué)發(fā)光免疫分析新進(jìn)展[J];分析試驗(yàn)室;2011年01期

4 陳浩全;曾Z諛，

本文編號：1270176