本文關(guān)鍵詞：p53修飾的腫瘤抗原致敏制備DC瘤苗及其抗腫瘤效應(yīng)

  更多相關(guān)文章： 黑色素瘤B16 樹突狀細(xì)胞 p53 基因修飾 腫瘤疫苗

【摘要】：目的： 觀察p53基因修飾、制備的樹突狀細(xì)胞（DC）瘤苗在體內(nèi)外的特異性殺瘤效應(yīng)，探討通過基因修飾腫瘤抗原來提高DC瘤苗的抗腫瘤免疫效應(yīng)的可能。 方法： 1、野生型p53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染黑色素瘤B16細(xì)胞，Real-time PCR和Western blot檢測p53轉(zhuǎn)染前、后的表達(dá)；凍融法提取p53修飾的腫瘤抗原（p53-Ag），體外沖擊同基因Km小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞，制得DC瘤苗。 2、MTT法檢測DC瘤苗對淋巴細(xì)胞的刺激增值效應(yīng)（MLR）及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）體外殺瘤效應(yīng)。實驗均設(shè)單純DC、B16-DC和p53-DC三組，MLR以DC為刺激細(xì)胞，脾淋巴細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，CTL以致敏T細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，B16為靶細(xì)胞，作常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)和觀察。 3、背部皮下接種B16細(xì)胞復(fù)制實體瘤模型，荷瘤小鼠隨機分成B16組、DC組、B16-DC組和p53-DC組，另設(shè)一正常對照組。分別于接種后的第1、7、14d，分3次在瘤周注射DC瘤苗，每3天測量一次腫瘤最大垂直長、短徑，計算瘤體球積和各組平均體積，描繪腫瘤生長曲線；第21d處死小鼠，取腫瘤組織和血液標(biāo)本，稱瘤重后計算各組平均瘤重，ELISA法檢測血清IL-12和IFN-γ含量變化。 結(jié)果： 1、p53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的腫瘤細(xì)胞均有p53基因及產(chǎn)物的表達(dá)，用該p53修飾的腫瘤抗原沖擊、制得的DC瘤苗完全符合成熟DC的形態(tài)特征； 2、DC瘤苗的體外效應(yīng)MLR：當(dāng)刺激/效應(yīng)細(xì)胞比值為1：40時，三組刺激指數(shù)各為1.49、2.49和2.93，B16-DC組、p53-DC組明顯高于DC組（P均＜0.05），p53-DC組也顯著高于B16-DC組（P＜0.05）；而比值為1：80時，，三組刺激指數(shù)雖有降低，但三組間差異的兩兩比較結(jié)果與1：40時相同（P均＜0.05）。CTL：以效/靶比為1：20時的殺傷率最高，三組各為30.00%、37.89%和52.47%，p53-DC組和B16-DC組均顯著高于DC組（P＜0.01），p53-DC組也顯著高于B16-DC組（P＜0.01）；而效/靶比為1：40時，三組殺傷率（24.24%、35.92%和46.63%）略有降低，但三組間兩兩比較，差異均十分顯著（P均＜0.01）。 3、DC瘤苗的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)接種后的腫瘤生長曲線顯示，B16組小鼠成瘤最早，生長最快；DC組成瘤晚，生長緩慢；B16-DC組和p53-DC組則成瘤最晚，生長最慢，9天后瘤體僅米粒大，且大部分瘤體呈消退趨勢。21天時，B16組平均瘤重為0.453g，DC組為0.025g，而B16-DC組和p53-DC組幾乎取不到腫瘤組織，差異十分顯著（P＜0.01）。病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，DC瘤苗治療組的腫瘤組織內(nèi)血管生成較少，有較多的淋巴細(xì)胞浸潤，細(xì)胞變性與壞死較多見。 4、ELISA檢測外周血細(xì)胞因子IL-12：各實驗組血清IL-12含量均較B16組顯著升高（P＜0.01），其中B16-DC組和p53-DC組明顯高于DC組（P＜0.01），p53-DC組又顯著高于B16-DC組（P＜0.01）。IFN-γ：除DC組外，各實驗組血清IFN-γ含量都較B16組顯著升高（P均＜0.01），B16-DC組和p53-DC組均顯著高于DC組（P均＜0.01），p53-DC組又明顯高于B16-DC組（P＜0.05）。p53-DC組的IL-12和IFN-γ含量均最高。 結(jié)論： 1、p53基因修飾確能增強腫瘤抗原誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答的能力，其修飾的DC瘤苗對淋巴細(xì)胞的增殖刺激能力較未經(jīng)修飾的DC更強； 2、在體外，p53修飾的DC瘤苗能明顯激發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答，提高T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用。 3、在體內(nèi)，p53修飾的DC瘤苗能顯著地抑制移植性腫瘤的生長，并明顯提高荷瘤動物外周血IL-12和IFN-γ的水平。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘達(dá)鑫;鄒莉玲;楊紫蘭;李雪梅;;中草藥瘤苗自動免疫實驗研究[J];江西中醫(yī)藥;1980年02期

2 伏雅琴;覃見效;王蔭棠;;幾種瘤苗對S_(180)免疫保護(hù)效應(yīng)的實驗研究[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1991年01期

3 顧君一;劉運義;;瘤苗療法發(fā)展近況[J];南通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);1993年03期

4 黃皎琳;高溫—固化瘤苗的研究[J];中國腫瘤臨床;1995年04期

5 劉振華,彭孝偉;瘤苗的研究近況[J];癌癥;1996年04期

6 史桂蘭,溫善祿,馮雪梅,范毅力;石蠟包埋癌組織瘤苗的實驗研究[J];實用腫瘤學(xué)雜志;1999年04期

7 駱云雅;DC瘤苗的研究新進(jìn)展[J];中國腫瘤生物治療雜志;2003年01期

8 王文慧,陳治龍;自體瘤苗的研究進(jìn)展[J];北華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2004年01期

9 郭峰,錢寶華,花美仙,許育,張樂之;荷瘤小鼠瘤苗治療療效與紅細(xì)胞天然免疫活性相關(guān)性及其意義[J];腫瘤學(xué)雜志;2004年04期

10 郭峰,錢寶華,花美仙,許育,張樂之;荷瘤小鼠瘤苗治療療效與紅細(xì)胞天然免疫活性相關(guān)性及其意義[J];中國腫瘤生物治療雜志;2004年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余建法;葉圣雅;;惡性腫瘤的瘤苗治療[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會普通外科專業(yè)委員會第九次學(xué)術(shù)年會暨省級繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2007年

2 宮偉雁;馮永堂;魏萍;苗乃法;牟東珍;吳國慶;孟潔;;CpG-ODN輔助DC瘤苗抗腫瘤的實驗研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

3 葉燕;張建賓;鄭云;周智東;夏大靜;;TLR聯(lián)合激活的DC瘤苗的抗腫瘤作用及其相關(guān)機制研究[A];浙江省免疫學(xué)會第六次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

4 王紅梅;;腫瘤抗原修飾和DC瘤苗的抗腫瘤免疫應(yīng)答研究[A];中國病理生理學(xué)會第十三屆腫瘤、第十四屆免疫專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

5 江然;孟芳琳;楊娟玲;王珉;戴平;戴雨希;歷光炎;沈玫;熊超;沙允文;梅澤如;蔣泳;周寶琴;陸寶成;曾志毅;張仁希;熊偉;陳環(huán)球;楊爾欣;趙祥生;唐金海;俞喬;張園;汪儀俊;穆懷德;馬永泉;;我們?yōu)槟[瘤病人制備并應(yīng)用自體瘤苗工作的報道[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

6 易平勇;余海;馬文學(xué);王青青;;雙重免疫分子膜表面修飾瘤苗的制備及抗腫瘤作用的研究[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

7 褚莉莉;竇駿;趙楓姝;唐權(quán);王永仿;顧寧;;小鼠IL-21瘤苗構(gòu)建及其抗腫瘤效應(yīng)研究[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

8 李寧;覃漢軍;周春霞;王冬梅;馬文波;林晨;張叔人;;前列腺癌趨化抗原基因修飾瘤苗研究[A];第九屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

9 夏大靜;章衛(wèi)平;王青青;潘建平;孫文佶;張立煌;鄭樹;曹雪濤;;淋巴細(xì)胞趨化因子與黑色素瘤抗原基因共轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞瘤苗抗腫瘤免疫作用的實驗研究[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

10 夏大靜;鄭樹;章衛(wèi)平;王青青;潘建平;朱敏;張立煌;曹雪濤;;白介素-18基因修飾增強樹突狀細(xì)胞瘤苗的抗腫瘤作用及其機制研究[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 仇逸 胡德榮;我國成功制備胃癌“瘤苗”[N];人民政協(xié)報;2002年

2 解放軍第309醫(yī)院教授 牛旗　整理 李杰;DC瘤苗推動腫瘤免疫治療[N];健康報;2010年

3 楊超倫;“太空瘤苗”研制邁出可喜一步[N];新華每日電訊;2003年

4 通訊員 胡德榮 記者 張?zhí)N;“瘤苗”治療肝胃癌[N];解放日報;2001年

5 不賴摘;腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)可防[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2001年

6 ;匯中外免疫專家擬突破腫瘤良策[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 健康時報特約記者 李杰;激發(fā)人體自滅癌細(xì)胞[N];健康時報;2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬征;全細(xì)胞瘤苗誘發(fā)動物保護(hù)性免疫機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

2 黃常新;膜表達(dá)熱休克蛋白和膜型超抗原突變體雙重修飾瘤苗的抗腫瘤作用的研究[D];浙江大學(xué);2004年

3 尹曉玲;IL-12真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及其瘤苗抗肺癌免疫作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

4 王東海;DC/C6融合瘤苗防治大鼠C6膠質(zhì)瘤的實驗研究[D];山東大學(xué);2005年

5 牛桂蓮;用IL-2轉(zhuǎn)基因B_（16）黑色素瘤瘤苗與特異性CTL細(xì)胞進(jìn)行小鼠腫瘤免疫治療的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

6 唐翌姝;1、細(xì)菌納米磁小體為載體的基因疫苗研究2、同種異基因白細(xì)胞聯(lián)合細(xì)胞瘤苗治療腫瘤的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

7 朱新梅;樹突狀細(xì)胞瘤苗治療大鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

8 姜宏景;GM-CSF基因修飾同種異體肺癌細(xì)胞系制備瘤苗治療肺癌的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

9 陳曉虹;MDC基因修飾的膜表達(dá)HSP70的瘤苗誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)及其機理探討[D];浙江大學(xué);2002年

10 李寧;阻斷共抑制信號途徑聯(lián)合趨化抗原基因修飾瘤苗治療腫瘤的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 褚莉莉;小鼠IL-21瘤苗抗腫瘤效應(yīng)及機制的研究[D];東南大學(xué);2006年

2 楊雪;高強度聚焦超聲制備DC瘤苗及其治療作用和促腫瘤凋亡作用的實驗研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2007年

3 王冰;p53修飾的腫瘤抗原致敏制備DC瘤苗及其抗腫瘤效應(yīng)[D];南昌大學(xué);2014年

4 覃新干;腫瘤壞死因子基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的瘤苗對小鼠機體免疫的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2001年

5 路靜;人B7-2瘤苗與DC瘤苗的制備及其體外聯(lián)合誘導(dǎo)抗食管癌的免疫作用[D];鄭州大學(xué);2005年

6 葉燕;TLR聯(lián)合激活的DC瘤苗的抗腫瘤作用及其相關(guān)機制研究[D];浙江大學(xué);2007年

7 曾波;CD44v6修飾DC融合瘤苗抗腫瘤作用和機理研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

8 楊f

本文編號：1263951