本文關鍵詞：p53修飾的腫瘤抗原致敏制備DC瘤苗及其抗腫瘤效應

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【摘要】：目的： 觀察p53基因修飾、制備的樹突狀細胞（DC）瘤苗在體內(nèi)外的特異性殺瘤效應，探討通過基因修飾腫瘤抗原來提高DC瘤苗的抗腫瘤免疫效應的可能。 方法： 1、野生型p53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染黑色素瘤B16細胞，Real-time PCR和Western blot檢測p53轉(zhuǎn)染前、后的表達；凍融法提取p53修飾的腫瘤抗原（p53-Ag），體外沖擊同基因Km小鼠骨髓來源的樹突狀細胞，制得DC瘤苗。 2、MTT法檢測DC瘤苗對淋巴細胞的刺激增值效應（MLR）及細胞毒性T淋巴細胞（CTL）體外殺瘤效應。實驗均設單純DC、B16-DC和p53-DC三組，MLR以DC為刺激細胞，脾淋巴細胞為效應細胞，CTL以致敏T細胞為效應細胞，B16為靶細胞，作常規(guī)細胞培養(yǎng)和觀察。 3、背部皮下接種B16細胞復制實體瘤模型，荷瘤小鼠隨機分成B16組、DC組、B16-DC組和p53-DC組，另設一正常對照組。分別于接種后的第1、7、14d，分3次在瘤周注射DC瘤苗，每3天測量一次腫瘤最大垂直長、短徑，計算瘤體球積和各組平均體積，描繪腫瘤生長曲線；第21d處死小鼠，取腫瘤組織和血液標本，稱瘤重后計算各組平均瘤重，ELISA法檢測血清IL-12和IFN-γ含量變化。 結果： 1、p53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的腫瘤細胞均有p53基因及產(chǎn)物的表達，用該p53修飾的腫瘤抗原沖擊、制得的DC瘤苗完全符合成熟DC的形態(tài)特征； 2、DC瘤苗的體外效應MLR：當刺激/效應細胞比值為1：40時，三組刺激指數(shù)各為1.49、2.49和2.93，B16-DC組、p53-DC組明顯高于DC組（P均＜0.05），p53-DC組也顯著高于B16-DC組（P＜0.05）；而比值為1：80時，，三組刺激指數(shù)雖有降低，但三組間差異的兩兩比較結果與1：40時相同（P均＜0.05）。CTL：以效/靶比為1：20時的殺傷率最高，三組各為30.00%、37.89%和52.47%，p53-DC組和B16-DC組均顯著高于DC組（P＜0.01），p53-DC組也顯著高于B16-DC組（P＜0.01）；而效/靶比為1：40時，三組殺傷率（24.24%、35.92%和46.63%）略有降低，但三組間兩兩比較，差異均十分顯著（P均＜0.01）。 3、DC瘤苗的體內(nèi)抑瘤效應接種后的腫瘤生長曲線顯示，B16組小鼠成瘤最早，生長最快；DC組成瘤晚，生長緩慢；B16-DC組和p53-DC組則成瘤最晚，生長最慢，9天后瘤體僅米粒大，且大部分瘤體呈消退趨勢。21天時，B16組平均瘤重為0.453g，DC組為0.025g，而B16-DC組和p53-DC組幾乎取不到腫瘤組織，差異十分顯著（P＜0.01）。病理學觀察發(fā)現(xiàn)，DC瘤苗治療組的腫瘤組織內(nèi)血管生成較少，有較多的淋巴細胞浸潤，細胞變性與壞死較多見。 4、ELISA檢測外周血細胞因子IL-12：各實驗組血清IL-12含量均較B16組顯著升高（P＜0.01），其中B16-DC組和p53-DC組明顯高于DC組（P＜0.01），p53-DC組又顯著高于B16-DC組（P＜0.01）。IFN-γ：除DC組外，各實驗組血清IFN-γ含量都較B16組顯著升高（P均＜0.01），B16-DC組和p53-DC組均顯著高于DC組（P均＜0.01），p53-DC組又明顯高于B16-DC組（P＜0.05）。p53-DC組的IL-12和IFN-γ含量均最高。 結論： 1、p53基因修飾確能增強腫瘤抗原誘導特異性免疫應答的能力，其修飾的DC瘤苗對淋巴細胞的增殖刺激能力較未經(jīng)修飾的DC更強； 2、在體外，p53修飾的DC瘤苗能明顯激發(fā)抗腫瘤免疫應答，提高T淋巴細胞對腫瘤細胞的特異性殺傷作用。 3、在體內(nèi)，p53修飾的DC瘤苗能顯著地抑制移植性腫瘤的生長，并明顯提高荷瘤動物外周血IL-12和IFN-γ的水平。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392

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