本文關(guān)鍵詞：1、人TNFR1-PLAD及其突變體基因克隆與表達純化及其生物學活性鑒定 2、小鼠TNF-α及其突變體基因克隆與表達鑒定

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【摘要】：TNFR1胞外段含有四個半胱氨酸富集區(qū)（CDR）區(qū)，在與TNF-α結(jié)合前首先通過CDR1區(qū)形成三聚體，所以CDR1區(qū)又稱為PLAD（pre-ligand assemblydomain）。本課題組前期研究采用噬菌體展示技術(shù)分別用sTNF-α和TNFR1為誘餌篩選到12AA的“TNF結(jié)合肽”和“TNFR封閉肽”，體內(nèi)、體外實驗均證實兩種肽都對TNF-α介導的生物學效應有較好的抑制作用。但由于短肽自身半衰期較短，極易通過腎小球濾過，無法充分發(fā)揮應有的藥效。因此，本實驗利用分子克隆技術(shù)及蛋白純化技術(shù)獲得PLAD三聚體化所需的關(guān)鍵肽段，試圖將該片段分別連接到“TNF結(jié)合肽”和/或“TNFR封閉肽”末端，使之通過TNFR1-PLAD的自身三聚化作用而聚合為三聚體，，延長兩種肽在體內(nèi)的的半衰期，為進一步研發(fā)抗TNF-α藥物奠定基礎(chǔ)。 隨著人們生活水平日益提高，肥胖也變得越來越普遍，全球范圍內(nèi)超重的人群數(shù)量多于體重不足的人群數(shù)量。隨著肥胖的流行，肥胖相關(guān)的一些疾病的發(fā)病率如代謝綜合征、非酒精性脂肪肝和II型糖尿病等也不斷增加，而胰島素抵抗是這些疾病發(fā)病機制中的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但其細胞水平的機制尚不完全清楚。腫瘤壞死因子-（TNF-α）作為脂肪組織分泌的脂肪細胞因子，它參與調(diào)節(jié)食欲、胰島素敏感性以及炎癥反應等各種生理和病理過程。TNF-α又分跨膜型（tmTNF-α）和分泌型（sTNF-α），tmTNF-α、sTNF-α都可以與TNFR相互作用，但引起的生物學功能并不相同。我們實驗室前期工作表明：tmTNF-α可殺傷對sTNF-α耐受的腫瘤細胞株，sTNF-α主要誘導細胞壞死，而tmTNF-α則主要誘導凋亡，因此推測tmTNF-α在胰島素抵抗中可能發(fā)揮的作用與sTNF-α也不相同。本文成功構(gòu)建表達野生型TNF-α-（即可表達sTNF-α，也可表達tmTNF-α）的TNFpIRES2-GFP-wtTNF質(zhì)粒、只表達tmTNF-α的pIRES2-GFP-tmTNF-α的質(zhì)粒和只表達sTNF-α的pIRES2-GFP-sTNF-α質(zhì)粒，并將其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染3T3-L1前脂肪細胞，以便進一步在體外比較研究兩型TNF-α對高糖誘導的胰島素抵抗的影響及其分子機制。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R3416

【共引文獻】

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本文編號：1253081