本文關(guān)鍵詞：不同濃度丙戊酸鈉對(duì)錨蛋白啟動(dòng)子活性的調(diào)控

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【摘要】：目的采用體外錨蛋白(Ank G)啟動(dòng)子介導(dǎo)熒光素酶報(bào)告基因活性的研究,探討丙戊酸鈉(VPA)對(duì)Ank G啟動(dòng)子活性的調(diào)控機(jī)制。方法通過對(duì)人和小鼠的Ank G啟動(dòng)子序列進(jìn)行比對(duì)分析,克隆小鼠Ank G啟動(dòng)子序列;將Ank G啟動(dòng)子片段克隆至熒光素酶報(bào)告基因(Luciferase)質(zhì)粒p GL3,構(gòu)建真核表達(dá)載體;采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將重組質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒分別與pRL-CMV共轉(zhuǎn)染至N2a細(xì)胞和293T細(xì)胞,同時(shí)給予0、0.5、1.0 mmol/L的VPA處理12 h后,采用雙熒光素酶法檢測(cè)Ank G啟動(dòng)子片段在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性及VPA處理后細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因的活性。結(jié)果酶切和測(cè)序鑒定證實(shí)Ank G啟動(dòng)子克隆及其表達(dá)載體構(gòu)建成功;熒光素酶活性檢測(cè)顯示Ank G啟動(dòng)子在N2a和293T細(xì)胞中均有較高的轉(zhuǎn)錄活性;0.5 mmol/L VPA處理兩種品系細(xì)胞12 h后,Luciferase活性都明顯上調(diào)。結(jié)論 VPA能夠從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控Ank G啟動(dòng)子的活性,體內(nèi)VPA對(duì)Ank G表達(dá)的調(diào)控可能是直接在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行的。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家中醫(yī)藥管理局人類疾病動(dòng)物模型三級(jí)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士創(chuàng)新基金(2012-1001-003)~~
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： Key Laboratory of Human Diseases Animal Models,State Administration of Traditional Chinese Medicine,Key Laboratory of Human Diseases Comparative Medicine of Ministry of Health,Institute of Medical Laboratory Animal Science,CAMS and PUMC,Beijing 100021,Ch

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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9 李海軍;孫筱放;;丙戊酸鈉對(duì)SCN3A基因表達(dá)的抑制作用[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年07期

10 趙智凝;周強(qiáng);李艷君;郭振軍;何芙蓉;;雙報(bào)告基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其功能鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年23期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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2 曾星;L型鈣通道CACNA1D調(diào)控前列腺癌細(xì)胞雄激素受體活性的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 何光耀;樹，

本文編號(hào)：1235553