本文關(guān)鍵詞：CFL相互作用蛋白的鑒定及其在斑馬魚心臟發(fā)育中的初步功能研究

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【摘要】：心臟是人體的重要器官,心臟發(fā)育相關(guān)基因正常發(fā)揮其功能是心臟發(fā)育的關(guān)鍵。探究心臟發(fā)育相關(guān)基因的功能,能夠?yàn)榱私庀忍煨孕呐K病的發(fā)病機(jī)制和干預(yù)性治療提供基礎(chǔ)。 斑馬魚CFL基因是從斑馬魚胚胎的cDNA文庫(kù)中克隆出來的一個(gè)心臟發(fā)育候選基因,可能在斑馬魚心臟發(fā)育過程中起重要作用。為研究該基因的功能,本文對(duì)CFL基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、制備了CFL蛋白的多克隆抗體、研究了斑馬魚胚胎發(fā)育過程中CFL基因的表達(dá)情況、RA信號(hào)對(duì)CFL表達(dá)的影響以及CFL與DVL2的相互作用。 生物信息學(xué)分析表明：CFL基因編碼278個(gè)氨基酸,含有一個(gè)ZF-CXXC結(jié)構(gòu)域。通過RT-PCR獲得了CFL cDNA,表達(dá)、純化了CFL蛋白并且制備了針對(duì)CFL的特異性多克隆抗體。胚胎原位雜交表明,CFL mRNA在斑馬魚發(fā)育各個(gè)時(shí)期均有表達(dá)。Western-blot結(jié)果表明,CFL在斑馬魚胚胎發(fā)育的過程中在胚胎期至36hpf期間表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢(shì),并且在24hpf時(shí)表達(dá)最強(qiáng),36hpf后表達(dá)有所下調(diào)。在成年斑馬魚的心臟、肌肉、卵、眼睛、脊索、鰭和鰓部位均有表達(dá)。 胚胎抗體染色結(jié)果顯示,在斑馬魚胚胎發(fā)育24hpf時(shí),CFL蛋白的表達(dá)范圍較廣,并且在脊索中表達(dá)量較高,在心臟中CFL主要在心室區(qū)域表達(dá)。 本研究室前期研究結(jié)果顯示CFL基因受到RA信號(hào)的調(diào)控。為進(jìn)一步研究CFL對(duì)斑馬魚心臟發(fā)育的調(diào)控機(jī)制,本文利用RA的抑制劑DEAB處理了斑馬魚之后,在24hpf時(shí)期進(jìn)行了胚胎原位雜交實(shí)驗(yàn),分析了DEAB對(duì)CFL表達(dá)的影響。結(jié)果顯示DEAB促進(jìn)CFL表達(dá)的上調(diào)。運(yùn)用免疫共沉淀技術(shù)分析RA處理的胚胎中CFL蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示CFL表達(dá)有所上調(diào)。因此,RA促進(jìn)CFL蛋白的表達(dá)。CO-IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CFL蛋白與WNT通路重要成員DVL2蛋白之間存在相互作用,提示CFL可能是RA信號(hào)與Wnt通路之間的聯(lián)系分子。 綜上所述,CFL可能通過與DVL2的相互作用而聯(lián)系RA信號(hào)與Wnt通路,進(jìn)而在斑馬魚心臟發(fā)育過程中起到重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王盼盼;彭夕洋;易珍;江志剛;鄧云;吳秀山;萬(wàn)永奇;;斑馬魚CFL基因的克隆、多克隆抗體的制備及分析[J];湖南文理學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

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本文編號(hào)：1235503