本文關(guān)鍵詞：CFL相互作用蛋白的鑒定及其在斑馬魚心臟發(fā)育中的初步功能研究

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【摘要】：心臟是人體的重要器官,心臟發(fā)育相關(guān)基因正常發(fā)揮其功能是心臟發(fā)育的關(guān)鍵。探究心臟發(fā)育相關(guān)基因的功能,能夠為了解先天性心臟病的發(fā)病機制和干預(yù)性治療提供基礎(chǔ)。 斑馬魚CFL基因是從斑馬魚胚胎的cDNA文庫中克隆出來的一個心臟發(fā)育候選基因,可能在斑馬魚心臟發(fā)育過程中起重要作用。為研究該基因的功能,本文對CFL基因進行了生物信息學分析、制備了CFL蛋白的多克隆抗體、研究了斑馬魚胚胎發(fā)育過程中CFL基因的表達情況、RA信號對CFL表達的影響以及CFL與DVL2的相互作用。 生物信息學分析表明：CFL基因編碼278個氨基酸,含有一個ZF-CXXC結(jié)構(gòu)域。通過RT-PCR獲得了CFL cDNA,表達、純化了CFL蛋白并且制備了針對CFL的特異性多克隆抗體。胚胎原位雜交表明,CFL mRNA在斑馬魚發(fā)育各個時期均有表達。Western-blot結(jié)果表明,CFL在斑馬魚胚胎發(fā)育的過程中在胚胎期至36hpf期間表達呈現(xiàn)上升趨勢,并且在24hpf時表達最強,36hpf后表達有所下調(diào)。在成年斑馬魚的心臟、肌肉、卵、眼睛、脊索、鰭和鰓部位均有表達。 胚胎抗體染色結(jié)果顯示,在斑馬魚胚胎發(fā)育24hpf時,CFL蛋白的表達范圍較廣,并且在脊索中表達量較高,在心臟中CFL主要在心室區(qū)域表達。 本研究室前期研究結(jié)果顯示CFL基因受到RA信號的調(diào)控。為進一步研究CFL對斑馬魚心臟發(fā)育的調(diào)控機制,本文利用RA的抑制劑DEAB處理了斑馬魚之后,在24hpf時期進行了胚胎原位雜交實驗,分析了DEAB對CFL表達的影響。結(jié)果顯示DEAB促進CFL表達的上調(diào)。運用免疫共沉淀技術(shù)分析RA處理的胚胎中CFL蛋白的表達情況,結(jié)果顯示CFL表達有所上調(diào)。因此,RA促進CFL蛋白的表達。CO-IP實驗結(jié)果顯示,CFL蛋白與WNT通路重要成員DVL2蛋白之間存在相互作用,提示CFL可能是RA信號與Wnt通路之間的聯(lián)系分子。 綜上所述,CFL可能通過與DVL2的相互作用而聯(lián)系RA信號與Wnt通路,進而在斑馬魚心臟發(fā)育過程中起到重要的作用。
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363

【參考文獻】

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1 王盼盼;彭夕洋;易珍;江志剛;鄧云;吳秀山;萬永奇;;斑馬魚CFL基因的克隆、多克隆抗體的制備及分析[J];湖南文理學院學報(自然科學版);2013年04期

2 張立鳳;桂永浩;鐘濤;王躍祥;蔣球;崇梅;孫淑娜;宋后燕;;視黃酸影響斑馬魚胚胎心臟房室分化[J];復(fù)旦學報(醫(yī)學版);2007年01期

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本文編號：1235503