本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌EsxA基因的克隆及表達(dá)

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【摘要】：目的在原核質(zhì)粒中克隆金黃色葡萄球菌(S.aureus)Esx A基因,并進(jìn)行表達(dá)及純化,為其功能研究奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)Gene Bank中S.aureus Esx A序列,設(shè)計(jì)特異性引物PCR擴(kuò)增Esx A基因,PCR產(chǎn)物純化后經(jīng)Eco RΙ和XhoΙ雙酶切,連接至p ET-28a(+)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá),His柱純化重組Esx A蛋白,SDS-PAGE和Western blot驗(yàn)證重組蛋白的表達(dá)。結(jié)果成功克隆Esx A基因,基因全長(zhǎng)294 bp,起始于ATG,終止于TAA,預(yù)測(cè)的分子量為11 036.2,等電點(diǎn)為4.61,經(jīng)雙酶切在294 bp處可見目的條帶,基因測(cè)序顯示Esx A在正確閱讀框內(nèi),提示重組蛋白構(gòu)建成功。SDS-PAGE顯示重組蛋白在分子量大約14.5×103 Mr處左右見到可溶性的蛋白表達(dá),Western blot分析識(shí)別14.5×103 Mr重組蛋白。結(jié)論在大腸桿菌中成功克隆表達(dá)Esx A蛋白,為其功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué);廣州市婦女兒童醫(yī)療中心檢驗(yàn)科;
【基金】：廣州市醫(yī)藥科技重點(diǎn)項(xiàng)目(201102A212013)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是人類化膿性感染中最常見的病原菌,可引起局部化膿感染,肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等,甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染[1]。近年來金黃色葡萄球菌的感染率上升,尤其隨著耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylo

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8 布冠好;鄭U，

本文編號(hào)：1232534