本文關鍵詞：弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)換模型的構(gòu)建

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【摘要】：剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細胞內(nèi)寄生可感染幾乎所有溫血動物的單細胞機會致病性原蟲,可引起人畜共患的弓形蟲病。弓形蟲侵入宿主細胞后,在宿主免疫反應作用下,弓形蟲從快速繁殖的速殖子轉(zhuǎn)換為緩慢生長、幾乎休眠狀態(tài)的緩殖子,并形成包囊長期存在于體內(nèi),以抵抗不良環(huán)境；但當宿主免疫受損或免疫力低下時,如腫瘤患者、AIDS患者等,不良環(huán)境被解除,包囊活化,緩殖子轉(zhuǎn)化為速殖子,引起嚴重弓形蟲病,甚至導致死亡。隨著艾滋病流行范圍的不斷擴大,寵物飼養(yǎng)的興起等,弓形蟲病的危害也日漸突出,成為一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。 速殖子與緩殖子的相互轉(zhuǎn)換是弓形蟲機會致病的生物學基礎和中心環(huán)節(jié)。雖經(jīng)大量和多年的研究,這種轉(zhuǎn)換機制仍不清楚。因此,探討速殖子與緩殖子相互轉(zhuǎn)換機制成為目前弓形蟲病研究的難點和熱點之一。 目前,弓形蟲體外誘導轉(zhuǎn)換研究主要集中在速殖子向緩殖子的轉(zhuǎn)化,而緩殖子向速殖子的轉(zhuǎn)化報道的較少。本研究通過在體外培養(yǎng)中加入或去除弓形蟲的不良生活因素,構(gòu)建弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)化模型。 研究目的： 構(gòu)建弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)換模型,為進一步探討弓形蟲病急慢性轉(zhuǎn)換機制打下基礎。 研究方法： 1、常規(guī)復蘇弓形蟲速殖子,在小鼠體內(nèi)傳代,并用純化的速殖子感染Hela細胞進行體外培養(yǎng)。 2、研究外源性壓力條件下速殖子向緩殖子的誘導轉(zhuǎn)換,觀察堿性pH、高溫、CO2饑渴條件下速殖子生的長狀態(tài),并分時間點收集培養(yǎng)混合物,提取弓形蟲總RNA,采用RT-PCR的方法分別檢測速殖子期特異性基因SAG1和緩殖子期特異性基因BAG1、BSR4。 3、探討去除外源性壓力因素恢復到正常培養(yǎng)條件后,緩殖子的轉(zhuǎn)歸,并分時間點收集培養(yǎng)混合物,提取弓形蟲總RNA,采用RT-PCR的方法分別檢測速殖子期特異性基因SAG1和緩殖子期特異性基因BAG1、BSR4。 研究結(jié)果： 1、在43℃條件下細胞迅速崩解難以為蟲體生長提供一個合適的環(huán)境,在41℃下大部分的細胞可以正常生長且可以快速誘導蟲體轉(zhuǎn)化。 2、在堿性pH、CO2饑渴、41℃體外培養(yǎng)中誘導蟲體,分時間點檢測期特異性基因,隨著誘導時間的延長,BAG1和BSR4mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸提高,SAG1逐漸減少并消失。 3.恢復到正常培養(yǎng)條件后,分時間點收集培養(yǎng)混合物,隨著誘導時間的延長,SAG1mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸提高. 結(jié)論： 成功構(gòu)建了一個穩(wěn)定的弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)化模型,為進一步研究弓形蟲病急慢性轉(zhuǎn)歸機制打下基礎。圖5副,表1
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R382.5

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