本文關(guān)鍵詞：弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)換模型的構(gòu)建

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【摘要】：剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生可感染幾乎所有溫血?jiǎng)游锏膯渭?xì)胞機(jī)會(huì)致病性原蟲,可引起人畜共患的弓形蟲病。弓形蟲侵入宿主細(xì)胞后,在宿主免疫反應(yīng)作用下,弓形蟲從快速繁殖的速殖子轉(zhuǎn)換為緩慢生長(zhǎng)、幾乎休眠狀態(tài)的緩殖子,并形成包囊長(zhǎng)期存在于體內(nèi),以抵抗不良環(huán)境；但當(dāng)宿主免疫受損或免疫力低下時(shí),如腫瘤患者、AIDS患者等,不良環(huán)境被解除,包囊活化,緩殖子轉(zhuǎn)化為速殖子,引起嚴(yán)重弓形蟲病,甚至導(dǎo)致死亡。隨著艾滋病流行范圍的不斷擴(kuò)大,寵物飼養(yǎng)的興起等,弓形蟲病的危害也日漸突出,成為一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。 速殖子與緩殖子的相互轉(zhuǎn)換是弓形蟲機(jī)會(huì)致病的生物學(xué)基礎(chǔ)和中心環(huán)節(jié)。雖經(jīng)大量和多年的研究,這種轉(zhuǎn)換機(jī)制仍不清楚。因此,探討速殖子與緩殖子相互轉(zhuǎn)換機(jī)制成為目前弓形蟲病研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。 目前,弓形蟲體外誘導(dǎo)轉(zhuǎn)換研究主要集中在速殖子向緩殖子的轉(zhuǎn)化,而緩殖子向速殖子的轉(zhuǎn)化報(bào)道的較少。本研究通過(guò)在體外培養(yǎng)中加入或去除弓形蟲的不良生活因素,構(gòu)建弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)化模型。 研究目的： 構(gòu)建弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)換模型,為進(jìn)一步探討弓形蟲病急慢性轉(zhuǎn)換機(jī)制打下基礎(chǔ)。 研究方法： 1、常規(guī)復(fù)蘇弓形蟲速殖子,在小鼠體內(nèi)傳代,并用純化的速殖子感染Hela細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。 2、研究外源性壓力條件下速殖子向緩殖子的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)換,觀察堿性pH、高溫、CO2饑渴條件下速殖子生的長(zhǎng)狀態(tài),并分時(shí)間點(diǎn)收集培養(yǎng)混合物,提取弓形蟲總RNA,采用RT-PCR的方法分別檢測(cè)速殖子期特異性基因SAG1和緩殖子期特異性基因BAG1、BSR4。 3、探討去除外源性壓力因素恢復(fù)到正常培養(yǎng)條件后,緩殖子的轉(zhuǎn)歸,并分時(shí)間點(diǎn)收集培養(yǎng)混合物,提取弓形蟲總RNA,采用RT-PCR的方法分別檢測(cè)速殖子期特異性基因SAG1和緩殖子期特異性基因BAG1、BSR4。 研究結(jié)果： 1、在43℃條件下細(xì)胞迅速崩解難以為蟲體生長(zhǎng)提供一個(gè)合適的環(huán)境,在41℃下大部分的細(xì)胞可以正常生長(zhǎng)且可以快速誘導(dǎo)蟲體轉(zhuǎn)化。 2、在堿性pH、CO2饑渴、41℃體外培養(yǎng)中誘導(dǎo)蟲體,分時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)期特異性基因,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),BAG1和BSR4mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸提高,SAG1逐漸減少并消失。 3.恢復(fù)到正常培養(yǎng)條件后,分時(shí)間點(diǎn)收集培養(yǎng)混合物,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),SAG1mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸提高. 結(jié)論： 成功構(gòu)建了一個(gè)穩(wěn)定的弓形蟲速殖子與緩殖子體外相互轉(zhuǎn)化模型,為進(jìn)一步研究弓形蟲病急慢性轉(zhuǎn)歸機(jī)制打下基礎(chǔ)。圖5副,表1
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R382.5

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本文編號(hào)：1232097