本文關(guān)鍵詞：HSV-2miR-H4-5p負(fù)調(diào)節(jié)CDKL2基因表達(dá)并抑制ActD引起的Vero細(xì)胞凋亡

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【摘要】：單純皰疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)編碼的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可與病毒神經(jīng)毒力蛋白ICP34.5mRNA互補(bǔ)結(jié)合并抑制其表達(dá),從而降低病毒感染對(duì)細(xì)胞的毒力作用,以減弱細(xì)胞對(duì)病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于宿主細(xì)胞基因目前仍不十分清楚.本研究證明,miR-H4-5p可通過靶向細(xì)胞周期依賴性激酶(cyclin-dependent kinase-like 2,CDKL2)基因表達(dá)抗防線菌素D(actinomycin D,Act D)誘導(dǎo)的非洲綠猴腎上皮細(xì)胞(African green monkey kidney cells,Vero)細(xì)胞凋亡.生物信息學(xué)方法在線預(yù)測(cè)miR-H4-5p潛在靶基因CDKL2的結(jié)合位點(diǎn),并構(gòu)建雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)miR-H4-5p靶向作用.數(shù)據(jù)表明,miR-H4-5p可有效抑制螢光素酶的表達(dá).q PCR和Western印跡數(shù)據(jù)表明,miR-H4-5p可在mRNA水平和蛋白水平抑制CDKL2表達(dá).構(gòu)建過表達(dá)載體pmR-mcherry/miR-H4-5p(cherry/H4-5p),將cherry/H4-5p與pmRmcherry空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Vero細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24 h后加入終濃度為1μg/m L放線菌素D誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡.MTT法、流式細(xì)胞術(shù)和Western印跡檢測(cè)Bax、Bcl-2表達(dá).數(shù)據(jù)表明,miR-H4-5p可抑制Act D誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞活性降低.本實(shí)驗(yàn)提示,miR-H4-5p可通過靶向調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞基因抑制細(xì)胞凋亡,可能以此方式共同參與HSV-2潛伏感染的建立.但是這種抑制凋亡作用的通路及其機(jī)制目前仍不清楚,miR-H4-5p是否可靶向更多的宿主基因仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證.
【作者單位】： 華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院;南方醫(yī)科大學(xué)研究生院;廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院皮膚科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(No.81171511)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 單純皰疹病毒Ⅱ型(HSV-2)屬皰疹病毒科α亞科,多引起生殖皰疹.原發(fā)感染后,HSV-2在骶尾神經(jīng)節(jié)內(nèi)長期潛伏,可在多種非特異條件刺激下被激活而復(fù)發(fā)[1].皰疹病毒編碼的microRNA(miRNA)被發(fā)現(xiàn)之前,潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體(latency-associatedtranscript,LAT)是皰疹病毒潛伏感染期間唯一可檢

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9 陳，

本文編號(hào)：1215578