本文關(guān)鍵詞：從原始卵泡培育MⅡ卵制備胚胎干細(xì)胞的可行性研究

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【摘要】：目的：1.建立從原始卵泡培育具有良好發(fā)育潛能的MⅡ卵的組織工程技術(shù)方案； 2.從原始卵泡培育的MⅡ卵制備胚胎干細(xì)胞。 方法：1.分別對(duì)出生21天的雌性小鼠或新生0.5天雌性小鼠卵巢異體移植21天的受體鼠腹腔注射PMSG10IU/只，44h后分別從21天的雌性小鼠卵巢或異體移植卵巢中用機(jī)械穿刺法分離COCs用于體外成熟培養(yǎng)。在小鼠卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中分別采用胎牛血清（FBS）、牛血清白蛋白（BSA）、血清替代物（KSR）作為蛋白添加物構(gòu)成不同的培養(yǎng)體系，比較觀察不同體系的卵母細(xì)胞成熟率、體外受精率和晚期囊胚發(fā)育率。2.新生鼠卵巢移植到宿主小鼠腎被膜下，21天時(shí)對(duì)宿主腹腔注射PMSG10IU/只，44h后用機(jī)械穿刺法分離卵巢移植物中的卵冠丘復(fù)合體，體外成熟培養(yǎng)16h，得到的IVM-MⅡ卵進(jìn)行體外受精，受精卵發(fā)育至囊胚時(shí)從內(nèi)細(xì)胞團(tuán)制備小鼠胚胎干細(xì)胞。 結(jié)果：1.三種不同體系在卵母細(xì)胞成熟、受精及晚期囊胚發(fā)育率上無(wú)顯著差異(P＞0.05)；2.從移植物所獲COCs在體外成熟后得到的IVM-MⅡ卵，可受精發(fā)育至囊胚并分離出ICM，成功制備2批胚胎干細(xì)胞。其中1批所獲干細(xì)胞系已傳代至第6代，，取第3代的干細(xì)胞做堿性磷酸酶及SSEA-1抗原檢測(cè)，結(jié)果均為陽(yáng)性，畸胎瘤試驗(yàn)結(jié)果表明所制備胚胎干細(xì)胞能分化為三個(gè)胚層來(lái)源的組織細(xì)胞； 結(jié)論：KSR、BSA均可替代FBS作為卵母細(xì)胞體外成熟體系的添加物使用，但KSR對(duì)卵丘的成熟和卵母細(xì)胞發(fā)育具有更好的綜合優(yōu)勢(shì)。首次報(bào)道證實(shí)了新生鼠卵巢（卵泡募集前卵巢）異體移植聯(lián)合體外成熟培養(yǎng)所獲的成熟卵（MⅡ卵）可用于制備小鼠胚胎干細(xì)胞系
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈干,吳春芳,叢笑倩,劉曉音,劉偉,曹誼林;胚胎干細(xì)胞在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)下表達(dá)vWF、CD34的研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2003年01期

2 劉鴻禧;胚胎干細(xì)胞的研究及其在臨床上的應(yīng)用[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

3 于增國(guó),倫永志;胚胎干細(xì)胞與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療[J];大連大學(xué)學(xué)報(bào);2003年06期

4 丁國(guó)治;;可轉(zhuǎn)變成多神細(xì)胞和組織的成人干細(xì)胞[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2003年06期

5 周毅,宋純,呂冰潔,宋一民,許評(píng),宋春芳;小鼠胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)基因治療甲狀旁腺功能低下癥的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2004年02期

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7 傅玉如,陳s

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