發(fā)布時間：2017-11-22 00:23

  本文關(guān)鍵詞：探討NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中抗炎及抗炎癥性骨破壞作用

  更多相關(guān)文章： NBD多肽 核轉(zhuǎn)錄因子-κB 骨髓炎模型 腫瘤壞死因子—a

【摘要】：骨髓炎目前在臨床上越來越常見,在創(chuàng)傷骨折中,用于固定的髓內(nèi)針、鋼板以及金屬固定架引入的金屬顆粒等可刺激細胞產(chǎn)生多種炎性因子導(dǎo)致持續(xù)的炎癥反應(yīng)并直接影響骨折愈合,同樣感染等細菌性炎癥或其他因素導(dǎo)致的長期慢性炎癥反應(yīng)的存在,可導(dǎo)致骨折延遲愈合以及骨不連。并且隨著抗生素的廣泛應(yīng)用或應(yīng)用錯誤甚至濫用,使許多致病菌產(chǎn)生了抗藥性,這加重了骨髓炎在治療過程中容易出現(xiàn)失敗效率高、感染高,治療時間長,花費大的特點。骨折延遲愈合以及骨不連產(chǎn)生的疼痛、肢體功能和心理障礙等,給患者帶來了極大的痛苦,同時也增加了患者和社會的經(jīng)濟負擔。而骨形成過程就是骨骼中的成骨細胞活性與破骨細胞活性這一相互拮抗制約的矛盾統(tǒng)一體的平衡過程,如何快速有效的治療骨髓炎成為骨科疾病治療中迫切需要解決的問題之一。骨形成過程就是骨骼中的成骨細胞活性與破骨細胞活性這一相互拮抗制約的矛盾統(tǒng)一體的平衡過程,其中成骨細胞的作用為合成骨基質(zhì),由間充質(zhì)干細胞(MSC)分化而來；破骨細胞的作用為降解骨基質(zhì),由骨髓單核巨噬細胞分化演變而成。骨折愈合過程中需要大量新的成骨細胞產(chǎn)生,從而加快骨質(zhì)合成與鈣化,增加骨的體積和密度。慢性持續(xù)性炎癥可刺激骨吸收,此方面研究已較成熟。但慢性持續(xù)性炎癥對骨形成過程中成骨細胞分化的影響,尤其是對間充質(zhì)干細胞分化成為成骨細胞過程的影響至今卻所知甚少,而阻止炎癥因子對骨再生抑制的研究對指導(dǎo)臨床實踐具有重要意義。 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB (nuclear factor kappa B)作為一種重要的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,參與免疫應(yīng)答,炎性反應(yīng)以及細胞凋亡等多種反應(yīng)物質(zhì)基因的表達調(diào)控,由于小分子NBD多肽抑制NF-κB必須調(diào)節(jié)蛋白(NF-κB essential modifier,NEMO)與IKKa和IkKβ的結(jié)合,從而抑制IKK激活,阻止破骨前體細胞轉(zhuǎn)化為功能性破骨細胞從而抑制炎癥性骨吸收,同時阻斷NF-κB通路對成骨細胞分化的抑制等作用從而恢復(fù)成骨細胞與破骨細胞的平衡,而且不影響NF-κB的基礎(chǔ)生理功能,進而調(diào)節(jié)機體的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和細胞生長周期。目前國際上對于NBD多肽的研究大部分在細胞水平,也有NBD多肽治療潰瘍性結(jié)腸炎及胰腺炎等試驗性的動物研究,雖然已有試驗證明NBD多肽在炎癥刺激下對破骨細胞的抑制及對促進成骨細胞分化的研究,但鮮有對動物骨髓炎模型方面的研究,因此需要我們進一步深入研究。 本實驗旨在對兔脛骨干骺端注射一定量細菌懸液的方法建立脛骨骨髓炎模型后,通過局部注射NBD多肽于脛骨慢性骨髓炎病灶區(qū)來研究NBD多肽在動物模型下炎癥環(huán)境中多肽抗炎及成骨效應(yīng)。 第一章兔脛骨慢性骨髓炎動物模型的建立的研究 目的探討兔脛骨骨髓炎的造模方法 方法健康新西蘭大白兔16只,于兔小腿脛骨干骺端內(nèi)側(cè)做一長約2cm切口,暴露干骺端骨質(zhì)后,電鉆鉆入1mm的克氏針,插入12號注射器針頭抽取3ml骨髓液后并依此注入0.1ml5%魚肝油酸鈉及0.5m10.5滴度金黃色葡萄球菌懸液,全身不預(yù)防應(yīng)用抗生素,術(shù)后回籠飼養(yǎng),3周后采用以下指標驗證模型：①傷口周圍肉眼大體一般情況；②兔右小腿脛骨側(cè)位X線觀察；③3周后隨機處死3只,取局部病變組織行細菌培養(yǎng)及鑒定；④3周后取隨機處死的實驗兔病變脛骨組織用10%福爾馬林固定,EDTA脫鈣2月,制作石蠟切片后經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察病理切片組織。 結(jié)果①一般情況觀察：可見傷口周圍腫脹,皮膚顏色蒼白,按壓腫塊較軟,且有波動感,傷口周圍無毛發(fā)生長,輕輕觸碰腫脹區(qū)域,動物有不適感。實驗動物早期精神萎靡,食欲下降,且飲水量大增。②3周后行右脛骨X線觀察,可見脛骨干骺端出現(xiàn)骨質(zhì)壞死,有死骨形成,骨膜反應(yīng)及軟組織腫脹明顯,并且不同醫(yī)師行Norden評分,最后Norden評分平均為4.1±0.3≥3分。③病灶周圍組織取材行細菌培養(yǎng)鑒定：3周后隨機處死3只實驗兔行脛骨病變組織取材,取材組織溶解于0.9%生理鹽水中,再取少量涂于血漿培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),48小時培養(yǎng)皿可見大量菌落形成,并對菌落行血漿凝固酶實驗,實驗結(jié)果提示所培養(yǎng)出的細菌均為金黃色葡萄球菌。④組織病理學(xué)觀察：3只隨機處死的實驗兔中,取下右小腿脛骨病變組織,光鏡下視野可見病理切片組織骨髓腔充滿大量炎癥細胞,并可見炎癥細胞包圍大量死骨組織的典型骨髓炎病理學(xué)表現(xiàn)。 結(jié)論：兔脛骨干骺端注射一定量的細菌懸浮液可以較好的建立慢性骨髓炎模型。 第二章探討NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中的抗炎效應(yīng) 目的探討NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中的抗炎效應(yīng) 方法健康新西蘭大白兔21只,通過上述方法局部注射細菌懸液于兔脛骨干骺端來制備慢性骨髓炎模型,3周后將這些成功模型隨機分為3組,每組7只,空白組：開6mm骨窗；對照組：開6mm骨窗+清創(chuàng)；治療組：開6mm骨窗+清創(chuàng)+局部注射NBD多肽,分組后于第一周至第六周在兔耳緣靜脈抽取靜脈血行血沉、C反應(yīng)蛋白及白血球細胞計數(shù),并在第六周每組隨機處死3只行病理學(xué)HE染色。 結(jié)果①分組后第4周三組CRP水平比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),分組后第5周治療組CRP水平與空白組、對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。分組前及分組后1～6周各組ESR水平比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。分組前及分組后1～6周各組白血球計數(shù)水平比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②病理學(xué)表現(xiàn)：在第六周三組病理切片HE染色對比可見空白組切片中大量炎癥細胞浸潤并可見明顯死骨,對照組少量炎癥細胞浸潤,很難找到死骨,而治療組切片中無驗證細胞浸潤并可見髓腔中大量纖維增生。 結(jié)論：實驗結(jié)果顯示局部注射NBD多肽對兔脛骨慢性骨髓炎模型有一定抗炎的效應(yīng)。 第三章探討NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中抗炎癥性骨破壞效應(yīng) 目的探討NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中的抗炎癥性骨破壞及成骨效應(yīng)。 方法健康新西蘭大白兔21只,通過在兔脛骨干骺端局部注射注射金葡菌懸液來建立骨脛骨慢性骨髓炎,將成功造模的骨髓炎模型隨機分為3組,空白組：干骺端開4mm的骨窗；對照組：干骺端開4mm骨窗+清創(chuàng)；治療組：干骺端4mm骨窗+清創(chuàng)+局部注射NBD多肽,在第四、六周行兔右脛骨X線觀察,并在第六周處死3組實驗動物,取病變脛骨組織行病理HE染色及Micro-CT檢查。 結(jié)果①X線觀察可見空白組、對照組第六周骨窗明顯可見,而治療組骨窗比較模糊；②Micro-CT三維重建可見治療組骨窗大小比空白組、對照組都縮小,并計算BV/TV相對百分比均有統(tǒng)計學(xué)意義；③病理HE染色可見治療組骨窗周圍新生成骨細胞明顯,其余兩組并無明顯成骨細胞,同時空白組大量炎癥細胞浸潤,對照組纖維組織增生。 結(jié)論實驗結(jié)果顯示局部注射NBD多肽在兔脛骨骨髓炎模型中有一定的抗炎癥性骨破壞作用及成骨效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R681.2;R-332

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李云飛;趙明東;戴文達;董健;王惠生;羅蘋;;兔耐甲氧西林金黃色葡萄球菌慢性骨髓炎模型[J];中華實驗外科雜志;2007年04期

2 陶智;王艷;齊金海;;醫(yī)院感染金黃色葡萄球菌的耐藥性探討[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2010年17期

3 李文鋒;侯樹勛;張偉佳;洪磊;;NBD多肽促進成骨細胞分化的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2011年17期

，

本文編號：1212831