本文關(guān)鍵詞：T細胞活化接頭蛋白棕櫚�；稽c突變抑制CD59 GPI介導(dǎo)的T淋巴細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

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【摘要】：目的構(gòu)建T細胞活化接頭蛋白(LAT)棕櫚酰化位點突變的慢病毒,感染Jurkat細胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株,觀察LAT棕櫚�；稽c突變對CD59介導(dǎo)的T淋巴細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。方法構(gòu)建陰性對照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因載體,包裝成慢病毒,分別感染Jurkat細胞,建立穩(wěn)定感染的細胞株。激光共聚焦顯微鏡觀察病毒感染效率及融合蛋白在細胞上的定位;CCK-8法檢測CD59單克隆抗體交聯(lián)前后各組細胞的增殖活性,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況,Western blot法檢測磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴細胞特異性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表達。結(jié)果共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)LAT-M組細胞的LAT分子在細胞膜上散在分布,CD59抗體交聯(lián)刺激后,未出現(xiàn)明顯的點簇狀聚集區(qū)。與陰性對照細胞相比,LAT-M細胞增殖活性明顯降低,中晚期凋亡細胞明顯增加;Western blot結(jié)果顯示,LAT-M組的PLC-γ1、LCK蛋白表達水平和陰性對照組大致相同,經(jīng)抗體活化后無明顯變化,而陰性對照細胞的PLC-γ1、LCK蛋白表達量下降。結(jié)論 LAT棕櫚�；稽c突變的Jurkat細胞脂筏定位功能缺失,細胞處于抑制狀態(tài),對CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介導(dǎo)的T淋巴細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有抑制作用。
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273206) 青島市公共領(lǐng)域科技支撐計劃項目[12-1-3-5-(2)-nsh]
【分類號】：R392
【正文快照】： CD59即糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)錨固糖蛋白[1],廣泛表達于多種組織細胞表面。CD59除作為一種補體調(diào)節(jié)蛋白(complement regulatoryproteins,CRP)抑制攻膜復(fù)合物(membrane attack complex,MAC)形成外,近年來還發(fā)現(xiàn)其在T細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用

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本文編號：1208466