本文關(guān)鍵詞：CHO DG44穩(wěn)定細(xì)胞株無(wú)血清培養(yǎng)基的研發(fā)與優(yōu)化

  更多相關(guān)文章： CHO細(xì)胞 無(wú)血清培養(yǎng)基 工藝優(yōu)化

【摘要】：單克隆抗體藥物近年來(lái)已進(jìn)入了高速發(fā)展時(shí)期,市場(chǎng)潛力十分巨大。而哺乳動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)工藝的研發(fā)也成為我國(guó)抗體藥物產(chǎn)業(yè)化的主要瓶頸之一。哺乳動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)工藝的研發(fā)包括培養(yǎng)基的研發(fā),細(xì)胞培養(yǎng)工藝的優(yōu)化及生物反應(yīng)器工藝放大等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于傳統(tǒng)的含血清培養(yǎng)基存在批間差大、潛在污染風(fēng)險(xiǎn)、不利于目的產(chǎn)物的分離純化等問(wèn)題,而商業(yè)化無(wú)血清培養(yǎng)基價(jià)格相對(duì)昂貴,且配方保密,不利于后續(xù)的培養(yǎng)工藝優(yōu)化。因此,自主研發(fā)可支持細(xì)胞高密度生長(zhǎng)與高表達(dá)量的無(wú)血清培養(yǎng)基,并進(jìn)行相應(yīng)的工藝優(yōu)化與反應(yīng)器放大,以滿足大量表達(dá)單克隆抗體的需求,對(duì)于抗體藥物的產(chǎn)業(yè)化來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。 本研究從CHO細(xì)胞培養(yǎng)基庫(kù)中,快速篩選得到支持CHO DG44宿主細(xì)胞正常生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)染的無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基BM。在BM基礎(chǔ)上,針對(duì)穩(wěn)定表達(dá)E6F6嵌合抗體的CHO DG44-10G11細(xì)胞株,通過(guò)硫酸葡聚糖、酵母水解物、檸檬酸鐵及起始葡萄糖與氨代謝相關(guān)氨基酸濃度的調(diào)整,獲得其個(gè)性化無(wú)血清培養(yǎng)基Opti-BM,可支持該細(xì)胞株批次培養(yǎng)密度超過(guò)7.0×106cells/mL,表達(dá)量超過(guò)70mg/L。研發(fā)得到相應(yīng)的流加培養(yǎng)基FM與FM plus,兩者結(jié)合使用可使CHODG44-10G11細(xì)胞株流加培養(yǎng)密度超過(guò)1.2×107cells/mL,培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至15天,抗體表達(dá)量超過(guò)150mg/L。 最后,在BIOSTAT(?) B-DCUⅡ2L多聯(lián)生物反應(yīng)器上進(jìn)行通氣與攪拌方面工藝的初步摸索,在反應(yīng)器上得到與搖瓶中一致的培養(yǎng)效果,實(shí)現(xiàn)了從搖瓶到反應(yīng)器的工藝放大。 本研究成功研發(fā)了針對(duì)CHO DG44-10G11細(xì)胞株的無(wú)血清培養(yǎng)基,并開(kāi)展了相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)工藝優(yōu)化、放大工作,初步建立了無(wú)血清培養(yǎng)基篩選與優(yōu)化平臺(tái),為其他穩(wěn)定細(xì)胞株無(wú)血清培養(yǎng)基的研發(fā)和優(yōu)化積累經(jīng)驗(yàn),同時(shí)也為哺乳動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)工藝的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1203559