本文關(guān)鍵詞：大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞與周細胞、星形膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)建立體外血腦屏障模型

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【摘要】：目的應(yīng)用原代培養(yǎng)的大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(brainmicrovessel endothelial cells,BMECs)與腦微血管周細胞(brain-microvessel pericytes,BMPC)、星形膠質(zhì)細胞(astrocytes,AS)共培養(yǎng)建立可模擬在體狀態(tài)的體外血腦屏障(blood-brain barrier,BBB)模型。方法原代分離、純化和培養(yǎng)大鼠BMECs、BMPC和AS,通過細胞形態(tài)學(xué)和免疫細胞化學(xué)染色方法鑒定原代培養(yǎng)的細胞,應(yīng)用Millicell細胞培養(yǎng)插(孔徑0.4μm)建立5種不同類型的體外BBB模型,經(jīng)跨內(nèi)皮電阻值(transendothelial electrical resistance,TEER)、熒光素鈉通透性(sodium fluorescent,Na-FLU)、堿性磷酸酶(AKP)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT1)的表達測定以及陽性藥在體內(nèi)和體外BBB通透量的相似性,比較評價其屏障功能。結(jié)果原代培養(yǎng)的BMECs呈典型的鋪路卵石樣結(jié)構(gòu),BMPC胞體較大且呈分枝狀,AS有細長突觸,胞質(zhì)較淺;免疫細胞化學(xué)染色證實原代細胞為目標(biāo)細胞;BMECs與BMPC、AS共培養(yǎng)后TEER值可達(478±25)Ω·cm2,Na-FLU的表觀滲透系數(shù)為[(8.23±0.78)×10-6]cm·s-1,AKP和γ-GT1表達分別為(6.90±0.27)金氏單位·g-1Pro,(4.39±0.32)μg·g-1Pro;陽性藥在體外BBB的表觀滲透系數(shù)(apparent permeability coefficient,Papp)與在體數(shù)據(jù)具有較好的相關(guān)性(R2=0.92)。結(jié)論原代培養(yǎng)的大鼠BMECs與BMPC、AS共培養(yǎng)建立的體外BBB模型在形態(tài)、結(jié)構(gòu)及屏障功能方面具備BBB的基本特征,為研究BBB的生理學(xué)、病理學(xué)以及篩選化合物提供了一種有用工具。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心;貴陽市婦幼保健院藥劑科;貴陽醫(yī)學(xué)院貴州省藥物制劑重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No 81260473) 貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項項目(黔科合中藥字2012-3013號);貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項(黔科合重G字[2013]4001) 貴州省優(yōu)秀青年科技人才培養(yǎng)對象專項基金(2013-45號)
【分類號】：R329.2;R-332
【正文快照】： (brain-microvessel pericytes,BMPC)、星形膠質(zhì)細胞(astro-cytes,AS)共培養(yǎng)建立可模擬在體狀態(tài)的體外血腦屏障(blood-brain barrier,BBB)模型。方法原代分離、純化和培養(yǎng)大鼠BMECs、BMPC和AS,通過細胞形態(tài)學(xué)和免疫細胞化學(xué)染色方法鑒定原代培養(yǎng)的細胞,應(yīng)用Millicell細胞培養(yǎng)

【參考文獻】

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1 李s，

本文編號：1197449