本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒Ⅰ型的Th細(xì)胞和B細(xì)胞表位重組核酸疫苗的構(gòu)建及真核表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(g B)和糖蛋白D(g D)的Th細(xì)胞和B細(xì)胞表位重組串聯(lián)核酸疫苗,并鑒定其真核表達(dá)。方法利用生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測(cè)HSV-1 g B和g D的Th細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位,結(jié)合已發(fā)表文獻(xiàn),設(shè)計(jì)合成HSV-1的Th細(xì)胞和B細(xì)胞表位重組串聯(lián)抗原基因(Th/B基因)。將Th/B基因定向克隆入真核表達(dá)載體p VAX1,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒p VAX1-Th/B。用制備的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,裂解細(xì)胞后經(jīng)Western blot鑒定其蛋白表達(dá)。結(jié)果預(yù)測(cè)得到了HSV-1 g B和g D的Th細(xì)胞和B細(xì)胞表位,成功構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒p VAX1-Th/B,經(jīng)測(cè)序確認(rèn)序列正確。SDS-PAGE分離出相應(yīng)大小的蛋白表達(dá)片段,經(jīng)Western blot鑒定并證實(shí)該重組核酸疫苗能夠在體外真核細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建HSV-1 Th細(xì)胞和B細(xì)胞表位重組串聯(lián)核酸疫苗,并能夠在體外真核細(xì)胞中表達(dá),為HSV-1核酸疫苗的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科重癥病房;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81200656) 遼寧省博士啟動(dòng)基金(20111097)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 單純皰疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virusⅠ,HSV-1)是一個(gè)嗜神經(jīng)的雙鏈DNA病毒,可以終身潛伏性感染神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。HSV-1感染宿主后引起角膜免疫病理反應(yīng)并發(fā)生單純皰疹病毒性角膜炎,感染的HSV-1長(zhǎng)期潛伏在三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi),導(dǎo)致角膜反復(fù)感染而最終導(dǎo)致失明,是一種嚴(yán)重的致盲性

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