本文關(guān)鍵詞：AGEs調(diào)控RAGE促進(jìn)人股動脈平滑肌細(xì)胞鈣化

  更多相關(guān)文章： 平滑肌細(xì)胞 鈣化 AGEs RAGE β-catenin OPG

【摘要】：動脈硬化、糖尿病血管并發(fā)癥是導(dǎo)致心、腦血管意外的主要原因。高出非糖尿病人群2--4倍，70％的2型糖尿病患者死于心血管疾病【1】。動脈粥樣斑塊形成是導(dǎo)致心血管事件最常見的病理改變，但近年對糖尿病血管并發(fā)癥的研究發(fā)現(xiàn)，除動脈粥樣斑塊形成這一傳統(tǒng)的危險因素外，血管鈣化亦是導(dǎo)致糖尿病患者心血管事件發(fā)生的重要因素。最近研究發(fā)現(xiàn)血管鈣化類似于骨的形成，它是由細(xì)胞介導(dǎo)的主動調(diào)節(jié)過程，同時存在平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變【4】。血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)作為動脈鈣化的主要細(xì)胞，它的體外誘導(dǎo)鈣化成為心血管疾病發(fā)病機(jī)制的重要研究模型。 最近研究發(fā)現(xiàn)AGEs在糖尿病血管鈣化的發(fā)生中可能發(fā)揮重要作用【5】�，F(xiàn)己證明人血管平滑肌細(xì)胞存在AGEs受體(RAGE)。DM患者體內(nèi)AGEs的代謝增強(qiáng)，致使AGEs增多【6】。AGEs與其受體RAGE相互結(jié)合，導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)和氧化應(yīng)激，是誘發(fā)糖尿病血管病變的主要原因之一【7】。糖尿病患者AGEs表達(dá)較正常人升高。AGEs通過與受體RAGE結(jié)合，改變細(xì)胞內(nèi)信號表達(dá)，使內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，多種因子表達(dá)發(fā)生變化，從而刺激平滑肌細(xì)胞遷移增殖，加快糖尿病動脈粥樣硬化進(jìn)一步演變【9】。AGEs誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并促進(jìn)血管鈣化的發(fā)生。 本研究發(fā)現(xiàn)AGEs促進(jìn)人股動脈平滑肌細(xì)胞增殖的鈣化，AGEs處理平滑肌細(xì)胞后其RAGE表達(dá)明顯增高，并呈濃度梯度依賴，同時OPG的表達(dá)和β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)聚集增強(qiáng)，研究發(fā)現(xiàn)通過上調(diào)RAGE,OPG，β-catenin表達(dá)水平而促進(jìn)平滑肌細(xì)胞鈣化，進(jìn)一步證實RAGE在糖尿病動脈中膜鈣化中的作用。 第一部分人股動脈平滑肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu) 目的： 建立人股動脈平滑肌體外培養(yǎng)模型 方法： 運用組織塊貼壁法，成功培養(yǎng)出人HSMCs，在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察并對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行SM a—actin免疫組化鑒定。 結(jié)果： 細(xì)胞生長良好，平滑肌細(xì)胞呈典型的“峰谷狀”生長，經(jīng)過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞SMα-actin高表達(dá)，說明成功培養(yǎng)出平滑肌細(xì)胞。 結(jié)論： 人股動脈組織塊貼壁法成功培養(yǎng)出HSMCs，經(jīng)過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞SMα-actin高表達(dá)，說明成功培養(yǎng)出平滑肌細(xì)胞。為后續(xù)實驗打好基礎(chǔ)。 第二部分AGEs調(diào)控平滑肌細(xì)胞鈣化的實驗研究 目的： 探討AGEs促進(jìn)平滑肌細(xì)胞鈣化 方法： 1，檢測各實驗組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度； 2，通過VON KOSSA染色說明AGEs促進(jìn)HSMCs鈣化； 3,免疫熒光檢測β-catenin的表達(dá)； 4， western blot檢測RAGE, β-catenin,OPG，E-cadherin蛋白的表達(dá)情況; 5, RAGEsiRNA干預(yù)后, western blot檢測RAGE, β-catenin, OPG,E-cadherin蛋白的表達(dá)情況,并與為干預(yù)之前作比較。 結(jié)果： 1.通過觀察各組細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)，鈣化+AGES組的鈣化斑塊明顯多于鈣化組。 2.細(xì)胞VON KOSSA染色結(jié)果表明隨著AGE-BSA濃度的增加，其鈣化表達(dá)的量逐漸升高，同時鈣化加AGEs（20mg/L）組細(xì)胞數(shù)量明顯多于鈣化組，細(xì)胞質(zhì)，，細(xì)胞核呈現(xiàn)粉紅色的數(shù)量亦增加。 3.細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測定結(jié)果顯示鈣化+AGEs20mg/L組的鈣離子濃度明顯升高，其次AGEs40mg/L組亦升高，這兩組P0.01，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，而鈣化組和AGEs20mg/L細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度亦明顯升高，P0.05。 4. β-catenin的表達(dá)隨著AGEs濃度的增加而增強(qiáng)，推斷可能由于AGEs的受體RAGE激活了wnt/β-catenin信號通路，同時其下游蛋白OPG的表達(dá)亦增強(qiáng). 5. siRNA干擾后, RAGE，β-catenin，OPG的表達(dá)降低。 結(jié)論 1.AGEs促進(jìn)人股動脈平滑肌細(xì)胞鈣化，并呈濃度梯度。 2.隨著AGEs干預(yù)濃度的增加，RAGE的表達(dá)增強(qiáng)，表明AGEs誘導(dǎo)的HSMCs增殖與RAGE表達(dá)有關(guān)； 3. AGEs通過與受體RAGE結(jié)合，激活wnt/β-catenin信號通路，促使其下游β-catenin，OPG表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞鈣化。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳志明;王曉鵬;趙惠琴;王東;;糖尿病性骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)制研究[J];國際骨科學(xué)雜志;2009年06期

2 涂焰明;吳鏗;;炎癥因子——核因子-κB對糖尿病心肌病的影響[J];國際心血管病雜志;2012年01期

3 張倫軍;丁曉琳;郭普;鐘政榮;沈繼龍;;耐亞胺培南銅綠假單胞菌的耐藥性及超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的基因分析[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年10期

4 陳華琴;尹虹;辛燕;蒲華麗;;女性2型糖尿病患者瘦素性激素與骨密度的關(guān)系[J];實用糖尿病雜志;2011年02期

5 俞兵;劉曉利;劉克儉;徐建;王文朋;何曉宏;張裕曾;;氟性骨損傷患者血清中骨形成抑制蛋白DKK-1的表達(dá)[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2013年08期

6 胡健;張明璽;李志丹;王銳;;麝香保心丸預(yù)防冠脈支架術(shù)后再狹窄50例的臨床觀察[J];中國民族民間醫(yī)藥;2013年15期

7 徐戈;黃琛;李志樂;文偉明;歐婷;王利兵;;煙酸對高脂血癥兔動脈粥樣硬化斑塊與膽固醇逆轉(zhuǎn)運相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2013年10期

8 郭長青;郭妍;陳相健;;D-半乳糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞非酶糖基化對鈣調(diào)節(jié)蛋白的影響[J];實用老年醫(yī)學(xué);2010年03期

9 張強(qiáng);包崇云;李龍江;;Wnt、BMP信號通路串話及在骨形成過程中的作用[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2013年16期

10 趙璐;劉永峰;李建科;庫婷;;脂質(zhì)代謝網(wǎng)通路關(guān)鍵基因調(diào)控牛肉品質(zhì)的研究進(jìn)展[J];食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報;2013年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬鳴飛;芪衛(wèi)顆粒治療DN臨床觀察及調(diào)節(jié)PEDF/USF_2表達(dá)對DN腎纖維化的干預(yù)機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 徐曉娟;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松Wnt/β-catenin信號通路與骨代謝相關(guān)因子的臨床研究與青娥丸的治療作用[D];華中科技大學(xué);2013年

3 許耘紅;睡眠剝奪與動脈粥樣硬化病變的相關(guān)性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

4 趙艷峰;eIF-2α磷酸化在E-/B48脂蛋白誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成中的作用研究[D];武漢大學(xué);2010年

5 賈曉健;以HDL受體SR-BI基因3'UTR為靶點的microRNA和小分子化合物的發(fā)現(xiàn)及作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 張麗俠;替諾福韋酯對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響及其機(jī)制探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 王偉;ABCG1基因功能調(diào)節(jié)在動脈粥樣硬化及巨噬細(xì)胞膽固醇外流中的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 韓立鵬;脂類食品體系中羧甲基賴氨酸生成機(jī)理的研究[D];華南理工大學(xué);2013年

9 劉沫言;2型糖尿病腎病鑒別診斷模型的驗證及新方程的建立[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

10 田國平;MiR-467b靶向調(diào)控小鼠巨噬細(xì)胞LPL對動脈粥樣硬化的影響[D];南華大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫中萃;視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞抗原提呈功能的變化對視網(wǎng)膜組織細(xì)胞凋亡的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 劉奎;Ghrelin通過PI3K/Akt通路抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成年大鼠心肌細(xì)胞凋亡[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

3 蔡嚇明;氧化應(yīng)激在糖尿病鼠高血糖所致骨質(zhì)疏松發(fā)病中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

4 曹曉麗;糖尿病大鼠血清中AGEs與其牙周炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

5 艾志敏;芪衛(wèi)顆粒干預(yù)糖尿病腎病臨床和部分作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

6 周心怡;下呼吸道感染病原菌分布及耐藥性分析[D];蘭州大學(xué);2013年

7 朱鶴;不同方式運動對生長期小鼠Wnt/β-catenin/Runx2信號通路的影響研究[D];華東師范大學(xué);2013年

8 張寧;白藜蘆醇對高糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響及其作用機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

9 郝萌萌;黃芪對小鼠胰島炎及胰島β細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[D];青島大學(xué);2013年

10 徐臻;三聯(lián)消石法治療肝膽管結(jié)石的療效研究[D];青島大學(xué);2013年

本文編號：1194303