本文關(guān)鍵詞：結(jié)核桿菌多抗原表位DNA疫苗對耐藥結(jié)核病小鼠模型的療效觀察

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【摘要】：目的研究由結(jié)核分枝桿菌抗原Hsp70，Ag85A和ESAT-6制成的多表位DNA疫苗的免疫效果及其聯(lián)合結(jié)核化療藥物對耐藥結(jié)核小鼠模型療效。 方法實(shí)驗(yàn)選用健康純系BALB/C小鼠，按不同的處理措施分為3組，每組30只：對照組1（A組），用不含疫苗的PBS溶液；對照組2（B組），用傳統(tǒng)疫苗BCG免疫小鼠；實(shí)驗(yàn)組（C組），用多表位DNA疫苗免疫。A，B和C組分別在第1，3和5周分別用PBS溶液、BCG和多表位DNA疫苗免疫小鼠，每次每只小鼠接受的免疫劑量為0.3mL。在三次免疫結(jié)束后，于小鼠眼球采血,離心機(jī)分離血清，嚴(yán)格按照間接ELISA法測定結(jié)核特異性抗體IgG，用固相雙抗體夾心ELISA法測定IL-2和IFN-γ。斷頸處死小鼠，取出脾臟,分散脾細(xì)胞,洗滌并調(diào)整脾臟細(xì)胞密度,加入結(jié)核PPD抗原培養(yǎng)72h后，按照常規(guī)MTT法測定脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)。將臨床新分離的耐異煙肼和利福平的雙重耐藥結(jié)核菌株常規(guī)培養(yǎng)后，調(diào)整菌液濃度至1×104cfu，取0.2ml經(jīng)小鼠尾靜脈注射。注射4周后隨機(jī)選5只小鼠，取其血液、肺臟和脾臟進(jìn)行涂片、染色、顯微鏡觀察，觀察到結(jié)核菌者為感染小鼠。隨機(jī)將感染小鼠模型分為對照組（D組），單純結(jié)核化療藥物治療組（E組）和化療藥物聯(lián)合多表位DNA疫苗治療組（F組），每組20只。D組不接受任何治療措施；E組用利福平和異煙肼治療；F組用利福平，異煙肼和結(jié)核多表位DNA疫苗聯(lián)合治療。藥物給藥方式為異煙肼0.03mg/(g·d)和利福平0.02mg/(g·d)灌胃，每日1次，連續(xù)10周；F組同時(shí)經(jīng)肌肉注射多表位DNA疫苗，每2周1次，連續(xù)10周。于治療結(jié)束時(shí)處死小鼠，稱取小鼠體重，取小鼠肺、肝和脾稱量并計(jì)算肺、肝、脾臟器指數(shù)。并取肺臟和脾臟研磨后用無菌肉湯培養(yǎng)基稀釋100倍，取0.5mL接種于改良羅氏雞卵平皿培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)4周后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，當(dāng)P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果結(jié)核多表位DNA疫苗組的特異性IgG抗體，IL-2和IFN-γ水高于BCG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；并且這兩組均明顯高于對照組1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；結(jié)核多表位DNA疫苗組的脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)高于BCG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并且都高于對照組1(P＜0.05)。與對照組（D組）相比，單純化療對細(xì)菌培養(yǎng)菌落數(shù)無明顯影響(P＞0.05)，而多表位DNA疫苗聯(lián)合化療治療組菌落數(shù)明顯比單純化療組和對照組（D組）低,(P＜0.05)。單純化療組的肺，，肝和脾臟器指數(shù)與對照組（D組）相比差異不大(P＞0.05)；而疫苗聯(lián)合化療治療組的肺，肝臟和脾臟指數(shù)均明顯低于單純化療組和對照組（D組）(P＜0.05)。 結(jié)論：由結(jié)核桿菌ESAT-6，Ag85A及Hsp70抗原構(gòu)成的多表位DNA疫苗免疫小鼠能產(chǎn)生較強(qiáng)的抗結(jié)核免疫反應(yīng)，可能通過刺激小鼠產(chǎn)生高水平的特異性IgG抗體、IL2和IFN-γ，和刺激特異性淋巴細(xì)胞增殖而加強(qiáng)耐藥結(jié)核病小鼠綜合治療的療效。
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392;R-332

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄭建華;;白介素-2研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2006年03期

2 ;Immunotherapy using IL-2 and GM-CSF is a potential treatment for multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis[J];Science China(Life Sciences);2012年09期

本文編號：1193627