本文關鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細胞對阿糖胞苷誘導的HL-60細胞凋亡影響的研究

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【摘要】：背景：間充質(zhì)干細胞是中胚層來源的多能干細胞,具有高度自我更新和多向分化潛能,不僅能在體外培養(yǎng)擴增,而且在特定條件下可以被誘導分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞及神經(jīng)細胞等。它存在廣泛,在全身多種組織中均可分離培養(yǎng),是細胞替代治療和組織工程的重要種子細胞,具有廣闊的臨床應用前景。在目前注冊的臨床試驗中,間充質(zhì)干細胞被應用于多種疾病,包括自身免疫性疾病、器官移植、慢性炎癥及組織損傷等,并取得了較好的療效。腫瘤是目前人類健康的主要威脅之一,以其高發(fā)病率及高死亡率引起極大的關注,成為研究的熱點。目前研究顯示,盡管腫瘤細胞自身及其相關基因突變在腫瘤的發(fā)病中起重要作用,其生存所需的腫瘤微環(huán)境對腫瘤的作用同樣不可忽視。構成腫瘤微環(huán)境的成分非常復雜,間充質(zhì)干細胞是其中重要的組成部分,因此,間充質(zhì)干細胞與腫瘤的關系引起人們極大的興趣,并進行了一系列的研究,但卻出現(xiàn)了許多相互矛盾的結果,其中涉及到的機制,仍有待進一步的研究。 目的：臍帶是間充質(zhì)干細胞的重要來源,因其取材方便、傳代能力強并且沒有倫理學限制等特點,成為最具臨床應用前景的間充質(zhì)干細胞。本研究旨在觀察人臍帶間充質(zhì)干細胞對急性髓細胞白血病細胞系HL-60的影響,尤其是其對化療藥物的敏感性的影響,并對涉及其中的機制進行探討,為人臍帶間充質(zhì)干細胞在急性白血病患者中的應用提供一定的理論基礎。 方法：(1)在誘導體系中,定向誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞向脂肪細胞、成骨細胞分化,用油紅O染色、Von Kossa染色觀測脂滴形成、鈣鹽沉積情況以鑒定人臍帶間充質(zhì)干細胞的多向分化潛能。(2)應用流式細胞儀檢測阿糖胞苷誘導的HL-60細胞單獨培養(yǎng)及與人臍帶間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)時的凋亡情況。(3)應用流式細胞儀檢測與人臍帶間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)對HL-60細胞細胞周期的影響。(4)應用Real-time PCR方法及Western Blot方法檢測與人臍帶間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)對HL-60細胞中Caspase3的mRNA和蛋白水平表達情況的影響。(5)應用transwell細胞共培養(yǎng)體系研究人臍帶間充質(zhì)干細胞發(fā)揮作用的機制。(6)在共培養(yǎng)體系中加入信號通路阻斷劑,觀測阻斷信號通路對人臍帶間充質(zhì)干細胞保護作用的影響。 結果：(1)分離出的人臍帶來源間充質(zhì)干細胞具有多向分化能力。(2)阿糖胞苷可以誘導HL-60細胞凋亡,且具有時間-劑量依賴性。人臍帶間充質(zhì)干細胞可以減少阿糖胞苷誘導的HL-60細胞凋亡,與細胞之間的比例沒有太大關系。(3)與人臍帶間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)可以將HL-60細胞阻滯在G0/G1期,阻止其進入S期。(4)人臍帶間充質(zhì)干細胞可以降低阿糖胞苷誘導的HI-60細胞內(nèi)凋亡蛋白Caspase3的mRNA和蛋白水平的表達。(5)在transwell培養(yǎng)體系中,人臍帶間充質(zhì)干細胞同樣可以減少阿糖胞苷誘導的HI-60細胞凋亡。(6)PI3K/Akt信號通路參與到人臍帶間充質(zhì)干細胞的保護作用,當使用信號通路阻斷劑處理時,可以部分逆轉(zhuǎn)人臍帶間充質(zhì)干細胞的作用。 結論：人臍帶間充質(zhì)干細胞通過分泌可溶性細胞因子減少阿糖胞苷誘導的HL-60細胞凋亡。其機制可能與通過調(diào)節(jié)HL-60細胞周期及下調(diào)Caspase3表達相關。PI3K/Akt信號通路參與這種保護作用。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【共引文獻】

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