本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)阿糖胞苷誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡影響的研究

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【摘要】：背景：間充質(zhì)干細(xì)胞是中胚層來源的多能干細(xì)胞,具有高度自我更新和多向分化潛能,不僅能在體外培養(yǎng)擴(kuò)增,而且在特定條件下可以被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞等。它存在廣泛,在全身多種組織中均可分離培養(yǎng),是細(xì)胞替代治療和組織工程的重要種子細(xì)胞,具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。在目前注冊(cè)的臨床試驗(yàn)中,間充質(zhì)干細(xì)胞被應(yīng)用于多種疾病,包括自身免疫性疾病、器官移植、慢性炎癥及組織損傷等,并取得了較好的療效。腫瘤是目前人類健康的主要威脅之一,以其高發(fā)病率及高死亡率引起極大的關(guān)注,成為研究的熱點(diǎn)。目前研究顯示,盡管腫瘤細(xì)胞自身及其相關(guān)基因突變?cè)谀[瘤的發(fā)病中起重要作用,其生存所需的腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤的作用同樣不可忽視。構(gòu)成腫瘤微環(huán)境的成分非常復(fù)雜,間充質(zhì)干細(xì)胞是其中重要的組成部分,因此,間充質(zhì)干細(xì)胞與腫瘤的關(guān)系引起人們極大的興趣,并進(jìn)行了一系列的研究,但卻出現(xiàn)了許多相互矛盾的結(jié)果,其中涉及到的機(jī)制,仍有待進(jìn)一步的研究。 目的：臍帶是間充質(zhì)干細(xì)胞的重要來源,因其取材方便、傳代能力強(qiáng)并且沒有倫理學(xué)限制等特點(diǎn),成為最具臨床應(yīng)用前景的間充質(zhì)干細(xì)胞。本研究旨在觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系HL-60的影響,尤其是其對(duì)化療藥物的敏感性的影響,并對(duì)涉及其中的機(jī)制進(jìn)行探討,為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在急性白血病患者中的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。 方法：(1)在誘導(dǎo)體系中,定向誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化,用油紅O染色、Von Kossa染色觀測脂滴形成、鈣鹽沉積情況以鑒定人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化潛能。(2)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測阿糖胞苷誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)及與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的凋亡情況。(3)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)HL-60細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。(4)應(yīng)用Real-time PCR方法及Western Blot方法檢測與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)HL-60細(xì)胞中Caspase3的mRNA和蛋白水平表達(dá)情況的影響。(5)應(yīng)用transwell細(xì)胞共培養(yǎng)體系研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)揮作用的機(jī)制。(6)在共培養(yǎng)體系中加入信號(hào)通路阻斷劑,觀測阻斷信號(hào)通路對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞保護(hù)作用的影響。 結(jié)果：(1)分離出的人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化能力。(2)阿糖胞苷可以誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡,且具有時(shí)間-劑量依賴性。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以減少阿糖胞苷誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡,與細(xì)胞之間的比例沒有太大關(guān)系。(3)與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)可以將HL-60細(xì)胞阻滯在G0/G1期,阻止其進(jìn)入S期。(4)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以降低阿糖胞苷誘導(dǎo)的HI-60細(xì)胞內(nèi)凋亡蛋白Caspase3的mRNA和蛋白水平的表達(dá)。(5)在transwell培養(yǎng)體系中,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞同樣可以減少阿糖胞苷誘導(dǎo)的HI-60細(xì)胞凋亡。(6)PI3K/Akt信號(hào)通路參與到人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的保護(hù)作用,當(dāng)使用信號(hào)通路阻斷劑處理時(shí),可以部分逆轉(zhuǎn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的作用。 結(jié)論：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過分泌可溶性細(xì)胞因子減少阿糖胞苷誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡。其機(jī)制可能與通過調(diào)節(jié)HL-60細(xì)胞周期及下調(diào)Caspase3表達(dá)相關(guān)。PI3K/Akt信號(hào)通路參與這種保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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10 郭偉旭;神經(jīng)生長因子聯(lián)合間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠腦損傷研究[D];鄭州大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1183848