本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型雙中和抗原表位嵌合型人3型腺病毒載體的免疫學(xué)研究

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【摘要】：目的構(gòu)建腸道病毒71型雙中和抗原表位嵌合型人3型腺病毒載體，為人3型腺病毒衣殼嵌合載體的應(yīng)用及基因工程疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 方法以前期構(gòu)建的人3型腺病毒骨架質(zhì)粒pBRAd△E3GFP-sp70為模板，搭橋PCR擴(kuò)增六鄰體不同超變區(qū)（HVR）同時(shí)嵌入EV71的SP55和SP70兩個(gè)中和表位的六鄰體突變基因片段hexon-sp55sp70，突變的六鄰體片段克隆入穿梭載體，酶切后與線性化的人3型腺病毒骨架質(zhì)粒pBRAd△E3GFP共同轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183，同源重組獲得陽(yáng)性重組腺病毒質(zhì)粒pBRsp70sp55Ad3egf，經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定并線性化后轉(zhuǎn)染AD293細(xì)胞拯救重組腺病毒。重組腺病毒經(jīng)大量擴(kuò)增純化后，進(jìn)行熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)和生長(zhǎng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)分析病毒的特性，Western blot和ELISA實(shí)驗(yàn)分析嵌合表位在六鄰體上的表達(dá)及在重組腺病毒粒子表面的暴露情況之后，用重組腺病毒免疫BALB/c小鼠，通過(guò)Western blot，ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)免疫小鼠的體液免疫反應(yīng)，微量中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗血清體外中和EV71病毒的活性。 結(jié)果在SP70嵌入六鄰體HVR1區(qū)的基礎(chǔ)上，SP55嵌入六鄰體HVR4區(qū)和HVR5區(qū)的重組腺病毒質(zhì)粒未能成功拯救出重組病毒，而SP55嵌入HVR2區(qū)成功拯救出重組腺病毒R1R2A3，而且沒(méi)有影響病毒的熱穩(wěn)定性和生長(zhǎng)特性。SP55、SP70表位在六鄰體蛋白融合表達(dá)并且暴露在病毒粒子表面。重組腺病毒初次免疫小鼠即誘導(dǎo)出SP55、SP70表位特異性抗體，多次免疫后抗體應(yīng)答加強(qiáng)。重組腺病毒較SP70-GST，SP55-GST融合蛋白免疫小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生更高滴度的IgG抗體，并且重組腺病毒免疫的抗血清能夠體外中和EV71病毒感染。 結(jié)論成功構(gòu)建表達(dá)雙中和抗原表位嵌合型人3型重組腺病毒，免疫小鼠后誘導(dǎo)出表位特異的體液免疫反應(yīng)，，本實(shí)驗(yàn)拓寬了六鄰體衣殼蛋白修飾的3型腺病毒作為多個(gè)外源表位展示載體工具的應(yīng)用，為其以后應(yīng)用于雙價(jià)或者多價(jià)疫苗打下了良好的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周志超;梁煥喜;李婷;鐘田花;田新貴;周榮;李瀟;;人3型腺病毒六鄰體高變區(qū)HVR1、HVR2、HVR5、HVR7的氨基酸修飾限制研究[J];病毒學(xué)報(bào);2012年04期

本文編號(hào)：1177027