本文關(guān)鍵詞：恥垢分枝桿菌體外非編碼RNA的鑒定與初步分析

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【摘要】：結(jié)核病(tuberculosis, TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)感染導(dǎo)致的一種慢性呼吸道強(qiáng)傳染性疾病。世界衛(wèi)生組織WHO稱目前全世界約有1/3的人口已經(jīng)潛伏感染了M. tuberculosis。近年來(lái),由于抗結(jié)核藥物的不合理使用,多重耐藥結(jié)核病(MDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核病(XDR-TB)出現(xiàn)的比率逐年增加。因此,探究M. tuberculosis的致病機(jī)制和耐藥機(jī)制變得十分重要。 非編碼RNA (non-coding RNA, ncRNA)廣泛存在于多種生物體內(nèi),參與調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、mRNA穩(wěn)定性、RNA分子加工與修飾等許多生物學(xué)過程。研究發(fā)現(xiàn),許多細(xì)菌的致病性與RNA密切相關(guān)。真核生物體液中存在許多參與調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號(hào)交流的體外RNA (extracellular RNA)。研究證實(shí)許多疾病的發(fā)生與體外RNA表達(dá)異常密切相關(guān)。多數(shù)情況下,研究者僅關(guān)心細(xì)菌體內(nèi)ncRNA的情況。最近一項(xiàng)研究表明,將M. tuberculosis與其培養(yǎng)基分離后,在培養(yǎng)基上清中提取到的RNA能夠誘導(dǎo)人細(xì)胞產(chǎn)生早期凋亡現(xiàn)象。由此,我們的目光轉(zhuǎn)向了細(xì)菌生長(zhǎng)所處的培養(yǎng)基中。 本文以分支桿菌的模式菌株恥垢分枝桿菌M. smegmatis mc2155培養(yǎng)基上清液中RNA為研究對(duì)象,對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)基內(nèi)RNA進(jìn)行了研究與描述。旨在為M. tuberculosis相似研究提供方法學(xué)上的參考與依據(jù),為進(jìn)一步探究M. tuberculosis致病機(jī)制提供借鑒。體外RNA的測(cè)序結(jié)果顯示,82.7%的RNA分子大小在18nt-28nt,這個(gè)范圍與miRNA, siRNA大小相當(dāng)：86%的RNA能與M. smegmatis mc2155基因組序列相吻合,證明在培養(yǎng)基上清中分離到的RNA來(lái)自M. smegmatis mc2155菌體內(nèi)部。根據(jù)表達(dá)量高低和在基因組上的定位,進(jìn)一步分析獲得了46個(gè)潛在的ncRNA,其中34個(gè)位于編碼區(qū)反義鏈,12個(gè)位于基因間區(qū)(IGR)。分支桿菌屬內(nèi)同源性比較發(fā)現(xiàn),.M. smegmatis mc2155培養(yǎng)基上清中RNA與M. tuberculosis等致病菌同源性較低,與一些生長(zhǎng)迅速慢、低致病性的細(xì)菌如Mycobacterium sp. KMS, Mycobacterium sp. MCS和Mycobacterium sp.JLS同源性較高。與M. smegmatis mc2155菌體內(nèi)部RNA測(cè)序結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),細(xì)菌體內(nèi)RNA和培養(yǎng)基中RNA在種類和相對(duì)數(shù)量上都有較大差別,因此對(duì)培養(yǎng)基中分離到的RNA來(lái)源做出了大膽假設(shè),認(rèn)為它們是由細(xì)菌通過分泌作用釋放到培養(yǎng)基中的。最后,我們選取了8條在體外表達(dá)量高且在細(xì)菌內(nèi)部表達(dá)量低的序列,利用Northern Blot成功檢測(cè)到其中三個(gè)位于IGR區(qū)域的RNA,分析了這些RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu),并將其列為下一步實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378.911;R3411

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 孟霞;孟憲臣;朱春紅;王亨;王金秋;聶佳佳;朱國(guó)強(qiáng);;腸炎沙門氏菌hfq缺失株的構(gòu)建和對(duì)fliC基因的調(diào)控分析[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李自慧;結(jié)核分枝桿菌非編碼RNA的系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和鑒定[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳秀琴;Hfq對(duì)霍亂弧菌環(huán)境適應(yīng)能力的影響及相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];青島大學(xué);2013年

2 付瑞;應(yīng)用siRNA技術(shù)抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達(dá)的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

3 張靜;華癸中慢生根瘤菌非編碼小RNA-RGS1的鑒定和作用機(jī)理初探[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1174000