本文關鍵詞：恥垢分枝桿菌體外非編碼RNA的鑒定與初步分析

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【摘要】：結核病(tuberculosis, TB)是由結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)感染導致的一種慢性呼吸道強傳染性疾病。世界衛(wèi)生組織WHO稱目前全世界約有1/3的人口已經潛伏感染了M. tuberculosis。近年來,由于抗結核藥物的不合理使用,多重耐藥結核病(MDR-TB)和廣泛耐藥結核病(XDR-TB)出現(xiàn)的比率逐年增加。因此,探究M. tuberculosis的致病機制和耐藥機制變得十分重要。 非編碼RNA (non-coding RNA, ncRNA)廣泛存在于多種生物體內,參與調節(jié)基因轉錄、mRNA穩(wěn)定性、RNA分子加工與修飾等許多生物學過程。研究發(fā)現(xiàn),許多細菌的致病性與RNA密切相關。真核生物體液中存在許多參與調節(jié)細胞間信號交流的體外RNA (extracellular RNA)。研究證實許多疾病的發(fā)生與體外RNA表達異常密切相關。多數情況下,研究者僅關心細菌體內ncRNA的情況。最近一項研究表明,將M. tuberculosis與其培養(yǎng)基分離后,在培養(yǎng)基上清中提取到的RNA能夠誘導人細胞產生早期凋亡現(xiàn)象。由此,我們的目光轉向了細菌生長所處的培養(yǎng)基中。 本文以分支桿菌的模式菌株恥垢分枝桿菌M. smegmatis mc2155培養(yǎng)基上清液中RNA為研究對象,對細菌培養(yǎng)基內RNA進行了研究與描述。旨在為M. tuberculosis相似研究提供方法學上的參考與依據,為進一步探究M. tuberculosis致病機制提供借鑒。體外RNA的測序結果顯示,82.7%的RNA分子大小在18nt-28nt,這個范圍與miRNA, siRNA大小相當：86%的RNA能與M. smegmatis mc2155基因組序列相吻合,證明在培養(yǎng)基上清中分離到的RNA來自M. smegmatis mc2155菌體內部。根據表達量高低和在基因組上的定位,進一步分析獲得了46個潛在的ncRNA,其中34個位于編碼區(qū)反義鏈,12個位于基因間區(qū)(IGR)。分支桿菌屬內同源性比較發(fā)現(xiàn),.M. smegmatis mc2155培養(yǎng)基上清中RNA與M. tuberculosis等致病菌同源性較低,與一些生長迅速慢、低致病性的細菌如Mycobacterium sp. KMS, Mycobacterium sp. MCS和Mycobacterium sp.JLS同源性較高。與M. smegmatis mc2155菌體內部RNA測序結果比較發(fā)現(xiàn),細菌體內RNA和培養(yǎng)基中RNA在種類和相對數量上都有較大差別,因此對培養(yǎng)基中分離到的RNA來源做出了大膽假設,認為它們是由細菌通過分泌作用釋放到培養(yǎng)基中的。最后,我們選取了8條在體外表達量高且在細菌內部表達量低的序列,利用Northern Blot成功檢測到其中三個位于IGR區(qū)域的RNA,分析了這些RNA的二級結構,并將其列為下一步實驗研究對象。
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.911;R3411

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 孟霞;孟憲臣;朱春紅;王亨;王金秋;聶佳佳;朱國強;;腸炎沙門氏菌hfq缺失株的構建和對fliC基因的調控分析[J];中國預防獸醫(yī)學報;2013年09期

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 李自慧;結核分枝桿菌非編碼RNA的系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和鑒定[D];北京市結核病胸部腫瘤研究所;2013年

中國碩士學位論文全文數據庫 前3條

1 陳秀琴;Hfq對霍亂弧菌環(huán)境適應能力的影響及相關基因的轉錄調控[D];青島大學;2013年

2 付瑞;應用siRNA技術抑制產腸毒素大腸桿菌LT基因表達的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

3 張靜;華癸中慢生根瘤菌非編碼小RNA-RGS1的鑒定和作用機理初探[D];華中農業(yè)大學;2013年

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本文編號：1174000