本文關(guān)鍵詞：zkscan3基因敲除小鼠模型的研究和EGFR分子轉(zhuǎn)磷酸化機(jī)理的研究

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【摘要】：目的 ZKSCAN3（人源）是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，前期研究發(fā)現(xiàn)該基因在結(jié)腸癌的形成過(guò)程中起著一定的作用，ZKSCAN3在侵襲性結(jié)腸癌細(xì)胞和其肝臟轉(zhuǎn)移病灶中過(guò)度表達(dá)，但在鄰近的非轉(zhuǎn)化組織中表達(dá)程度很低，但是,至今為止還沒(méi)有系統(tǒng)的ZKSCAN3基因正常生理功能研究的報(bào)告，鑒于其在自噬、腫瘤病理生物學(xué)中的重要作用，通過(guò)zkscan3（鼠源）基因敲除小鼠模型來(lái)確定其正常的生理功能就具有十分重要的意義。 方法 1.通過(guò)CRE雜交系統(tǒng)敲除野生型小鼠的zkscan3基因的2號(hào)外顯子，并對(duì)敲除小鼠的后代做基因型鑒定。 2.采用RT-PCR方法半定量zkscan3基因在野生型小鼠各個(gè)器官的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究做好前期準(zhǔn)備。 3.定量PCR，使用定量PCR進(jìn)一步對(duì)zkscan3的敲除結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)使用定量精確分析zkscan3在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞以及成年小鼠各個(gè)器官中的表達(dá)情況。 4.使用流式細(xì)胞分析技術(shù)分析成年野生型小鼠和zkscan3敲除小鼠胸腺CD3+細(xì)胞及脾臟中CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分比含量的差別。 5.分別用zkscan3敲除小鼠和野生型小鼠的CDNA進(jìn)行Microarray分析，找出與zkscan3功能相關(guān)的基因。 6.對(duì)小鼠進(jìn)行人工抗原卡介苗刺激，檢測(cè)小鼠體內(nèi)免疫應(yīng)答曲線，并檢測(cè)小鼠血液指標(biāo)。 結(jié)果 1.對(duì)雜交新生小鼠的基因鑒定結(jié)果顯示，zkscan3基因的2號(hào)外顯子確實(shí)被敲除。 2.對(duì)小鼠各個(gè)器官進(jìn)行RT-PCR結(jié)果顯示，zkscan3在小鼠不同器官中表達(dá)存在明顯差異，尤其在卵巢、睪丸以及胸腺中高表達(dá)。 3.定量PCR結(jié)果顯示，zkscan3基因2號(hào)外顯子確實(shí)被敲除；而且zkscan3基因在野生型小鼠的不同器官中存在差異性表達(dá)，尤其在胃、卵巢、脾臟、前列腺和脾臟中高表達(dá)。 4.流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，敲除小鼠胸腺中CD3+淋巴細(xì)胞數(shù)量上比在野生型小鼠中有顯著的升高；同時(shí)在脾臟中,CD4+淋巴細(xì)胞和CD8+淋巴細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量也比在野生型有顯著升高。 5.Microarray結(jié)果顯示，，敲除zkscan3后，表達(dá)發(fā)生顯著變化的基因主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)。 6.對(duì)小鼠進(jìn)行抗原免疫刺激后，發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，zkscan3基因敲除小鼠的免疫應(yīng)答出現(xiàn)紊亂，血液檢測(cè)指數(shù)顯示，zkscan3基因敲除小鼠小鼠可能出現(xiàn)貧血癥狀。 結(jié)論 初步研究結(jié)果顯示，zkscan3基因在小鼠體內(nèi)可能是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控基因，根據(jù)已有數(shù)據(jù)推斷，zkscan3很可能對(duì)免疫系統(tǒng)起到抑制的作用，在小鼠體內(nèi)我們發(fā)現(xiàn)，它的敲除會(huì)導(dǎo)致小鼠免疫功能的上升，并且會(huì)造成免疫系統(tǒng)對(duì)外來(lái)抗原刺激的免疫應(yīng)答紊亂，同時(shí)也會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響。 目的 表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR），一個(gè)眾所周知的致癌蛋白，在細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期和許多癌癥疾病中起著重要的作用。雖然表皮生長(zhǎng)因子受體的二聚化被認(rèn)為是表皮生長(zhǎng)因子受體激活的一個(gè)主要途徑，但是有關(guān)表皮生長(zhǎng)因子受體被激活之后，表皮生長(zhǎng)因子受體之間如何相互作用進(jìn)行轉(zhuǎn)磷酸化以及自身磷酸化仍然不為所知。所以進(jìn)一步研究EGFR在Y845位轉(zhuǎn)磷酸化作用以及其自身磷酸化激酶活性將為EGFR活化及功能調(diào)節(jié)機(jī)制提供新的見(jiàn)解。 方法 1.免疫沉淀和免疫印跡 2.體外激酶實(shí)驗(yàn) 3.體外轉(zhuǎn)磷酸化實(shí)驗(yàn) 4.轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)EGFR細(xì)胞株的建立 5.細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) 6.體外DNA摻入實(shí)驗(yàn) 結(jié)果 EGFR分子845位的酪氨酸轉(zhuǎn)磷酸化會(huì)影響其自身自磷酸化。 EGFR分子845位的酪氨酸突變后，轉(zhuǎn)磷酸化作用缺陷的分子激酶活性消失。 EGFR分子845位酪氨酸突變后，對(duì)其二聚體的磷酸化作用消失。 EGFR分子845位酪氨酸突變后，其刺激細(xì)胞生長(zhǎng)和DNA合成的能力下降。 結(jié)論 表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR，其845位酪氨酸的轉(zhuǎn)磷酸化作用與表皮生長(zhǎng)因子受體的子磷酸化作用以及激酶活性有關(guān)。當(dāng)將表皮生長(zhǎng)因子受體845位的酪氨酸替換為苯丙氨酸后，它對(duì)配體刺激作用的生物學(xué)反應(yīng)消失，這說(shuō)明了這一轉(zhuǎn)磷酸化位點(diǎn)對(duì)其功能的重要性。所以，我們的研究結(jié)果使得對(duì)于表皮生長(zhǎng)因子受體的激活認(rèn)識(shí)更加深入，并可能為治療各種與異常表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)和活化的癌癥一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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1 謝錠;程樺;Carlos M.Isales;;葡萄糖依賴(lài)性促胰島素多肽受體基因敲除小鼠不同部位骨密度的動(dòng)態(tài)改變[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年04期

2 杜智勇;粟永萍;徐建明;廖嵐;冉新澤;李軍;王峰超;唐棠;;嚴(yán)重?zé)齻缙赟RC-3基因敲除小鼠肝臟糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年17期

3 熊浩;褚漢啟;黃孝文;韓芳;吳振恭;周良強(qiáng);崔永華;;小鼠耳蝸Na-K-2Cl聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)子-1的定位及其缺失后的耳蝸組織學(xué)改變[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2007年01期

4 朱俊艷;陳利萍;李林;鄭海波;陳騰;;多巴胺D3受體對(duì)安非他明誘導(dǎo)的條件性位置偏愛(ài)小鼠的作用[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2007年06期

5 劉英莉;忻菁;顧勇;林善錟;;血管緊張素Ⅱ 1a型受體基因敲除對(duì)糖尿病狀態(tài)下腎小球足細(xì)胞及其骨架蛋白的影響[J];上海醫(yī)學(xué);2009年09期

6 范志剛;葛堅(jiān);;活化星形膠質(zhì)細(xì)胞去抑制調(diào)控小鼠視神經(jīng)再生的實(shí)驗(yàn)研究[J];眼科學(xué)報(bào);2005年04期

7 許慶友;丁英鈞;朱立;劉力劍;劉麗;趙玉庸;下澤達(dá)雄;藤田敏郎;;腎上腺髓質(zhì)素基因敲除小鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎腎臟α-SMA表達(dá)特點(diǎn)及纈沙坦的作用[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2006年07期

8 陳子賢;盛哲津;邵云潮;施德源;陳統(tǒng)一;;骨保護(hù)素基因敲除小鼠發(fā)生骨質(zhì)疏松癥的特征[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

9 桑景葒;劉欣;;基因敲除小鼠在疾病研究中的應(yīng)用[J];生物學(xué)通報(bào);2009年12期

10 朱國(guó)斌;曾秋棠;;AdipoR1在ApoE基因敲除小鼠粥樣斑塊中的表達(dá)及其變化[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王婷婷;張季;張炳昌;張秀娟;邵珊珊;方麗;趙家軍;;TSHR基因敲除小鼠的表型及血液生化指標(biāo)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 相芬芬;李聞捷;;βB2晶體蛋白基因敲除小鼠生精能力降低的機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 楊德業(yè);黃曉燕;高瞻;來(lái)丹丹;褚茂平;施翔翔;周希;張懷勤;;Pax-8基因敲除小鼠心臟中FGF-6基因表達(dá)上調(diào)[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

4 張麗娟;金暉;孫子林;;高脂飲食對(duì)LDL受體基因敲除小鼠骨微結(jié)構(gòu)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)成立十周年論文匯編[C];2011年

5 楊婭;王艷紅;謝謹(jǐn)捷;李治安;;ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的超聲生物顯微鏡與病理的對(duì)照分析[A];第十屆全國(guó)超聲心動(dòng)圖學(xué)術(shù)會(huì)議論文[C];2010年

6 雒文田;吳小燕;房浩;田竹芳;青才文江;矢野明彥;;用表達(dá)重組人TSH受體基因的細(xì)胞免疫IFN-γ和THF-α基因敲除小鼠來(lái)研究IFN-γ和THF-α在Graves病發(fā)病中的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

7 錢(qián)國(guó)鋒;Eveline Baumgart-Vogt;;轉(zhuǎn)錄因子Runx2/PPAR嗾在PEX11浜缺失所致的小鼠骨發(fā)育不全中的作用研究[A];2011年浙江省骨質(zhì)疏松與骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)年會(huì)暨《骨質(zhì)疏松癥診治進(jìn)展》專(zhuān)題研討會(huì)論文匯編[C];2011年

8 張茜;蘆曉紅;Huichen Wang;Kamel Khalili;崔建奇;;Purα對(duì)維持神經(jīng)細(xì)胞基因完整性的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

9 鄒慧麗;趙廣宇;宿長(zhǎng)軍;;快速眼動(dòng)睡眠剝奪對(duì)中樞5羥色胺缺失小鼠Orexin神經(jīng)元活性的影響[A];2008年中國(guó)睡眠研究會(huì)第五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

10 任安經(jīng);陳超;謝志芳;宋堯;袁文俊;張幼怡;章衛(wèi)平;;鋅指蛋白Zbtb20調(diào)節(jié)心血管生理功能的初步研究[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 羅劍;骨骼發(fā)育重要調(diào)控分子被發(fā)現(xiàn)[N];上�？萍紙�(bào);2009年

2 趙和云;白細(xì)胞介素－10的應(yīng)用研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

3 記者 付東紅;硫化氫可縮小動(dòng)脈粥樣硬化斑塊[N];健康報(bào);2008年

4 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版公司 提供;抗哮喘基因位點(diǎn)找到[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

5 衣曉峰;我留美學(xué)者鎖定癌癥治療藥物新靶點(diǎn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

6 記者 衣曉峰;癌癥治療藥物新靶點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

7 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳西玲;低氧性肺動(dòng)脈高壓中亞硝基谷胱甘肽還原酶的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2009年

2 耿燕;Fstll對(duì)于出生時(shí)肺的成熟起至關(guān)重要的作用[D];南京大學(xué);2011年

3 魯靖;SAPAP3基因敲除小鼠中的皮層—紋狀體突觸功能缺陷和類(lèi)OCD行為[D];浙江大學(xué);2007年

4 謝志芳;鋅指蛋白Zbtb20肝細(xì)胞特異性基因敲除小鼠對(duì)CCL_4肝損傷的敏感性及其機(jī)理研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 孫東云;化瘀滌痰通路中藥調(diào)控腎上腺髓質(zhì)素抑制腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 張亞文;Jak2的缺失通過(guò)減弱Raf-1/MEK1/Sp-1信號(hào)通路并eNOS及STAT活性損傷內(nèi)皮功能[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

7 蕭瑤;組織型纖溶酶原激活物（tPA）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在小鼠肝纖維化中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

8 金壽德;Abhd2基因敲除小鼠年齡相關(guān)性肺氣腫及其發(fā)病機(jī)制的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

9 于巖波;腸易激綜合征神經(jīng)調(diào)控異常分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2011年

10 韓琳;腎上腺髓質(zhì)素抑制細(xì)胞增殖的作用及鱉甲煎丸對(duì)其表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 侯良絹;MKP-1表達(dá)與UT-B基因敲除小鼠抑郁樣行為的關(guān)系[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

2 張毅敏;Perilipin 1基因敲除小鼠脂肪組織纖維化研究[D];鄭州大學(xué);2013年

3 朱娟娟;UT-B基因敲除小鼠免疫功能的研究[D];廣西大學(xué);2013年

4 滕麗萍;FMR-1基因敲除小鼠的焦慮及探索行為分析[D];浙江大學(xué);2010年

5 楊建凱;Ephrin-B2基因敲除小鼠腦損傷后反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞有利于保護(hù)組織和促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

6 蔣金金;硫酸鋅對(duì)高脂喂養(yǎng)ApoE基因敲除小鼠保護(hù)作用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

7 黃磊;zkscan3基因敲除小鼠模型的研究和EGFR分子轉(zhuǎn)磷酸化機(jī)理的研究[D];蘇州大學(xué);2014年

8 趙娟娟;Otx2和PV在PDGFR-β基因敲除小鼠上丘的免疫細(xì)胞化學(xué)變化[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

9 張蕊;Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪聲暴露的初步研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 趙華山;UT-B基因敲除小鼠發(fā)生進(jìn)展型房室傳導(dǎo)阻滯機(jī)制的初步探討[D];延邊大學(xué);2007年

本文編號(hào)：1173968