發(fā)布時間：2017-11-11 09:15

  本文關(guān)鍵詞：核因子E2相關(guān)因子2基因沉默對缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 心肌梗死 核因子E相關(guān)因子 小干擾RNA 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞凋亡

【摘要】：目的探討核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)基因沉默對缺氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)凋亡的影響,為干細(xì)胞移植治療心肌梗死提供較優(yōu)良的種子細(xì)胞。方法將沉默小干擾RNA(siRNA)Nrf2的慢病毒載體(LV-GFP-siRNA-Nrf2)轉(zhuǎn)染入大鼠MSC(GFP-LV-MSC~(Nrf2-/-),簡稱MSC~(Nrf2-/-)),采用Western印跡法檢測Nrf2基因RNA干擾(RNAi)前后的蛋白質(zhì)表達(dá)變化。實(shí)驗細(xì)胞經(jīng)缺氧預(yù)處理后分入4組:缺氧沉默Nrf2的MSC組(MSC~(Nrf2-/-)缺氧組),缺氧常態(tài)Nrf2的MSC組(MSC~(Nrf2+/-)缺氧組),沉默Nrf2的MSC組(MSC~(Nrf2-/-)常氧組),常態(tài)Nrf2的MSC組(MSC~(Nrf2+/-)常氧組)。采用Annexin V/7-AAD染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,細(xì)胞免疫熒光法測凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Caspase)3的表達(dá)水平,Western印跡法測定Nrf2及其下游靶點(diǎn)血紅素加氧酶-1(HO-1)蛋白質(zhì)表達(dá)水平,以及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)水平。結(jié)果干擾細(xì)胞內(nèi)Nrf2蛋白質(zhì)后,MSC~(Nrf2-/-)常氧組的Nrf2核蛋白表達(dá)水平顯著低于MSC~(Nrf2+/-)常氧組(P0.05)。細(xì)胞缺氧后6h,MSC~(Nrf2+/-)缺氧組和MSC~(Nrf2-/-)缺氧組的細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率均顯著高于MSC~(Nrf2+/-)常氧組和MSC~(Nrf2-/-)常氧組(P值均0.05),MSC~(Nrf2-/-)缺氧組的細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率均顯著高于MSC~(Nrf2+/-)缺氧組(P值均0.05)。MSC~(Nrf2-/-)缺氧組見大量Caspase3蛋白質(zhì)表達(dá),MSC~(Nrf2+/-)缺氧組Caspase3蛋白質(zhì)表達(dá)減少;MSC~(Nrf2+/-)常氧組和MSC~(Nrf2-/-)常氧組均未見Caspase3蛋白質(zhì)明顯表達(dá)。MSC~(Nrf2+/-)常氧組與MSC~(Nrf2-/-)常氧組間Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。與MSC~(Nrf2+/-)常氧組比較,MSC~(Nrf2+/-)缺氧組的Nrf2、HO-1、Bax蛋白質(zhì)水平均顯著升高(P值均0.05),Bcl-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著降低(P0.05);MSC~(Nrf2-/-)缺氧組的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平均顯著降低(P值均0.05),Bax蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。與MSC~(Nrf2+/-)缺氧組比較,MSC~(Nrf2-/-)缺氧組的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平均顯著降低(P值均0.05),Bax蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論沉默細(xì)胞中的Nrf2基因可顯著降低干細(xì)胞對缺氧的耐受能力,進(jìn)一步加速細(xì)胞凋亡。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(NSFC 81360021) 貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字號LKZ[2012]29號)資助項目
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是組織工程中最常劑盒購自美國eBioscience公司,兔抗大鼠Nrf2、用的種子細(xì)胞之一。然而研究[1]證實(shí),局部組織中血紅素加氧酶(HO)-1、Bcl-2、Bax、天冬氨酸半胱缺血、缺氧微環(huán)境和早期炎性反應(yīng)均不利于移植細(xì)氨酸蛋白酶(Caspase)3、GAPDH和核內(nèi)參抗體胞的

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 代志琰;李剛;徐啟桓;姚集魯;韓曉燕;楊林;陳文思;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表達(dá)及鑒定[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年01期

2 范晴;謝芝勛;謝志勤;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝麗基;羅思思;;牛病毒性腹瀉病毒E2結(jié)構(gòu)蛋白的原核表達(dá)、純化及鑒定[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年02期

3 劉霜;鞠鶴鵬;戚中田;邊中啟;秦照玲;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2中關(guān)鍵組氨酸位點(diǎn)突變體的構(gòu)建與感染性[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年05期

4 代志琰;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2與 CD81關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版);2003年02期

5 吳紅專,劉福安,朱道中,陳義為,梁志清;傳染性喉氣管炎病毒北京E2株gC基因的克隆及其部分序列測定[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2000年04期

6 戴勝軍;;華晨金杯E2發(fā)動機(jī)廠房超大面積特殊地坪綜合施工技術(shù)[J];科技資訊;2008年22期

7 王占飛;隋偉寧;吳權(quán);;E2地震作用下部分填充鋼管混凝土橋墩非線性時程分析及抗震性能評價[J];工程力學(xué);2011年S1期

8 J. P. Draayer,G. Popa,J. G. Hirsch,C. E. Vargas;形變核中的E2和M1強(qiáng)度 :贗-SU(3)模型的應(yīng)用(英文)[J];高能物理與核物理;2004年12期

9 王博揚(yáng);邵衛(wèi)星;呂占軍;董雅琴;劉爽;王建;吳發(fā)興;張志;劉自立;李曉成;;2012年我國部分地區(qū)豬瘟流行病學(xué)調(diào)查及E2部分基因遺傳演化分析[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年05期

10 李光華;;強(qiáng)耦合 SU(3)極限的 E2躍遷[J];長沙水電師院學(xué)報(自然科學(xué)版);1991年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 代志琰;李剛;徐啟桓;姚集魯;韓曉燕;楊林;陳文恩;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表達(dá)及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

2 鐘彥偉;成軍;施雙雙;劉妍;夏小兵;王剛;陳菊梅;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源單鏈可變區(qū)抗體的篩選與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國感染病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

3 劉莉;楊金菊;何湘;高媛;鞠艷芳;吳瓊;李戩;宋穎博;陳勇;杜雪梅;柳曉蘭;高建恩;孫啟鴻;;抗丙酮酸脫氫酶復(fù)合體E2(PDC—E2)的抗體相應(yīng)抗原表位的鑒定及應(yīng)用[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

4 萬雷;黃宏興;劉慶思;柴生構(gòu);魏合偉;;骨康對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者骨密度、血清E2、SOD、MDA的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 魏廣力;肖淑華;劉昌孝;;LC／MS~n法鑒定大鼠體內(nèi)E2的代謝產(chǎn)物[A];第八次全國藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

6 陳國強(qiáng);;降低E2和R2軋機(jī)完成3道次軋制總耗時[A];全國冶金自動化信息網(wǎng)2013年會論文集[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 本報記者 朱祝何;人造板甲醛釋放限量E2等級將被剔除[N];中國質(zhì)量報;2014年

2 山西 閆愷福;海爾FCD-JTHML45-Ⅲ型電熱水器顯示“E2”的檢修[N];電子報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉媛;高變區(qū)1抑制丙型肝炎病毒包膜蛋白E2誘生交叉中和抗體[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 吳健敏;豬瘟病毒E2抗原在T4噬菌體表面的展示及免疫原性的研究[D];中國人民解放軍軍需大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 邸文淑;早期先兆流產(chǎn)的中醫(yī)證型分布規(guī)律及其與E2、P的相關(guān)性研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 郭淼;腹腔鏡卵巢囊腫剝除術(shù)對卵巢E2、FSH、LH激素水平的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

3 楊青青;護(hù)胎飲對脾腎虧虛型早期先兆流產(chǎn)患者血清E2、P、β-HCG水平影響的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

4 鄒路遙;17β-E2聯(lián)合順鉑對人卵巢癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的影響及相關(guān)機(jī)制研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2011年

5 呂寬;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者血清E2、IL-6、IGF-Ⅰ及瘦素水平的臨床研究[D];山東大學(xué);2006年

，

本文編號：1170738