本文關(guān)鍵詞：2型豬鏈球菌AdcR蛋白的原核表達

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【摘要】：目的表達2型豬鏈球菌(Streptococcus suis 2)調(diào)控因子AdcR蛋白,為研究其在2型豬鏈球菌中調(diào)控組氨酸三聚體家族蛋白的作用機制奠定基礎(chǔ)。方法通過與相關(guān)家族蛋白進行同源性比較,在2型豬鏈球菌05ZYH33全基因組序列中找出編碼AdcR的基因。以AdcR基因序列為基礎(chǔ),利用Primer5.0設(shè)計引物,采用PCR擴增AdcR基因,經(jīng)BamHⅠ和HindIII雙酶切后將目的片段通過T4DNA連接酶連接至表達載體pET32a,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌E.coli BL21,加入IPTG至終濃度為0.1mmol/L,37℃誘導4h表達AdcR蛋白,然后利用His親和層析柱純化AdcR蛋白。結(jié)果通過Blast分析,從2型豬鏈球菌05ZYH33全基因組序列中找到編碼AdcR的編碼基因05SSU0109。以合成的特異引物PCR擴增出469bp的AdcR片段,連接原核表達載體pET32a后轉(zhuǎn)化E.coli,經(jīng)IPTG 37℃誘導4h,成功表達出AdcR蛋白,其分子質(zhì)量單位為40ku,與理論值相符。經(jīng)His-Tag親和層析純化,獲得較高純度的重組AdcR蛋白。結(jié)論在大腸埃希菌中成功表達了可溶性的AdcR重組蛋白,為AdcR在2型豬鏈球菌中調(diào)控組氨酸三聚體家族蛋白作用機制研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京師范大學生命科學學院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所;南京大學生命科學學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81071317,81172794,31170124) 南京軍區(qū)醫(yī)學科技創(chuàng)新課題(No.ZX39)
【分類號】：R378.12
【正文快照】： 原核生物體內(nèi)含有大量的金屬調(diào)節(jié)蛋白(metalsensor proteins),其功能是作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,調(diào)節(jié)編碼金屬特異性、細胞膜結(jié)合進出系統(tǒng)以及胞質(zhì)金屬螯合劑等基因的轉(zhuǎn)錄,從而控制細胞內(nèi)金屬離子的濃度[1-2]。其中,AdcR(adhesin competence repressor)是原核生物中廣泛存在的轉(zhuǎn)錄阻遏

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本文編號：1170465