本文關(guān)鍵詞：n-3多不飽和脂肪酸對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激及其毒性的調(diào)控機(jī)制

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【摘要】：本課題以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤系SH-SY5Y為模型，研究n-3多不飽和脂肪酸對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及其毒性的調(diào)控機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法和Hoechst染色觀察和研究n-3多不飽和脂肪酸對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)下SH-SY5Y細(xì)胞生存活性和細(xì)胞凋亡的影響；采用ATP含量測(cè)試試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP的水平；采用相關(guān)氧化應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)試試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH含量、SOD酶活；采用RT-PCR技術(shù)，研究與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的Bcl-2、Bax的基因表達(dá)以及氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白UCP2、UCP4的基因表達(dá)。 研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)SH-SY5Y細(xì)胞用500μM H2O2處理后，細(xì)胞內(nèi)發(fā)生明顯的凋亡現(xiàn)象，細(xì)胞生存率明顯下降，細(xì)胞內(nèi)ATP含量下降，抗凋亡蛋白Bcl-2基因表達(dá)下降，促凋亡蛋白Bax基因表達(dá)增加，這說明細(xì)胞產(chǎn)生了較高的氧化應(yīng)激，細(xì)胞通過線粒體凋亡途徑引發(fā)的凋亡現(xiàn)象十分明顯。此外，GSH含量也顯著下降。當(dāng)SH-SY5Y細(xì)胞用EPA、DHA預(yù)處理24h后，細(xì)胞生存活性升高，凋亡減弱，細(xì)胞內(nèi)單位蛋白ATP含量也得到恢復(fù)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Bcl-2表達(dá)增加，Bax表達(dá)下降。此外，細(xì)胞內(nèi)GSH含量、SOD酶活都發(fā)生了不同程度的升高，在60μM時(shí)作用最顯著。RT-PCR結(jié)果顯示，n-3PUFA對(duì)UCP2、UCP4的mRNA表達(dá)水平無顯著性作用。 因此，n-3PUFA可以抑制過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞活性下降及細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，而且可以通過作用于Bcl-2家族基因及ATP含量調(diào)控線粒體凋亡途。此外，n-3PUFA可以提高GSH含量、SOD酶活提高細(xì)胞的抗氧化能力，，調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激，抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡從而保護(hù)細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R3416

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1167407