本文關(guān)鍵詞：TAT-Ag85B蛋白疫苗的制備和抗結(jié)核分枝桿菌效果評價

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【摘要】：目的探討利用HIV反向轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(TAT-PTD)系統(tǒng)表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)性Ag85B蛋白疫苗的抗結(jié)核分枝桿菌效應(yīng)。方法構(gòu)建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B質(zhì)粒,原核表達(dá)純化和鑒定后獲得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;將BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組:Ag85B組,TAT-Ag85B組,PBS組。重組蛋白經(jīng)皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周處死部分小鼠,ELISA檢測小鼠血清中Ag85B抗體滴度,以及脾細(xì)胞分泌的γ干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素2(IL-2)的水平;用流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞經(jīng)Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86變化情況;剩余小鼠經(jīng)尾靜脈感染H37Rv結(jié)核分枝桿菌,感染后第1、2、4、8周動態(tài)監(jiān)測小鼠肺和脾內(nèi)結(jié)核分枝桿菌載量,并在感染后8周取肺臟進(jìn)行HE染色,觀察肺組織病變情況。結(jié)果成功獲得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;與Ag85B相比,TAT-Ag85B誘導(dǎo)小鼠表達(dá)高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺結(jié)核分枝桿菌載量明顯減少,肺組織病變范圍小、結(jié)核分枝桿菌數(shù)量少。另外,TAT-Ag85B增強(qiáng)巨噬細(xì)胞表面分子CD80/CD86的表達(dá)。結(jié)論 TAT-Ag85B蛋白疫苗增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的抗原提呈能力,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生強(qiáng)烈的Th1免疫應(yīng)答,有一定的抗結(jié)核分枝桿菌保護(hù)作用。
【作者單位】： 安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫與檢驗教研室;安徽理工大學(xué)免疫與感染研究所;安徽理工大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81302524,81202294,81172778) 安徽省自然科學(xué)基金(1208085QH162,KJ2013A105,2013SQRL029ZD)
【分類號】：R392
【正文快照】： 近年來,結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢[1],研究更有效的疫苗是控制結(jié)核病的主要途徑。85B抗原(antigen 85B,Ag85B)是結(jié)核分枝桿菌屬(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌的、具有強(qiáng)烈免疫原性的蛋白質(zhì)[2-3],并且對MTB感染的小鼠肺部有一定的保護(hù)效應(yīng)[4]。但是,單純Ag85B

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本文編號：1165040