本文關鍵詞：轉化生長因子β3聯(lián)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白2雙基因誘導骨髓間充質干細胞向成骨細胞的分化

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【摘要】：目的：探討慢病毒介導的轉化生長因子β3(transforming growthfactor β3, TGF-β3)聯(lián)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogenetic protein-2, BMP-2)在誘導骨髓間充質干細胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells, BMSC)向成骨細胞表型轉化中的可能性及相互作用機制。 方法：1.構建慢病毒：構建攜帶綠色熒光蛋白、tgfβ3和BMP-2基因的重組慢病毒載體,包裝、生產(chǎn)重組后的慢病毒(Lv-GFP、Lv-tgfβ3-GFP、Lv-BMP2-GFP、Lv-BMP2-tgfβ3-GFP);2.原代細胞培養(yǎng)：取幼兔骨髓間充質干細胞,體外培養(yǎng)、傳代,至第三代用于實驗；3.轉染與檢測：將包裝后的重組慢病毒按所攜帶的不同基因分四組轉染體外培養(yǎng)的第三代骨髓間充質干細胞,繼續(xù)體外培養(yǎng),于轉染后1周分別提取各細胞的總RNA和蛋白,分別采用實時定量PCR技術、免疫印跡法檢測各組中目的基因和相應蛋白的表達情況。 結果：通過重組慢病毒轉染技術,可以將目的基因tgfβ3和BMP-2同時整合入骨髓間充質干細胞內(nèi),并實現(xiàn)了雙基因的穩(wěn)定表達。成功轉染的骨髓間充質干細胞中基因tgfβ3和BMP-2在核酸及蛋白水平均明顯高于單基因轉染組及空白對照組(P0.05),提示tgfβ3聯(lián)合BMP-2有更高的誘導BMSC向成骨表型轉化的潛能,且兩者之間具有協(xié)同作用。 結論：通過慢病毒轉染技術將tgfβ3和BMP-2整合入體外培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞內(nèi)使其在細胞內(nèi)穩(wěn)定表達,能誘導其向成骨表型分化,通過不同組的檢測結果表明,雙基因組的協(xié)同作用克服了單一基因組的不足,可以為干細胞為基礎的成骨組織工程提供新的方法。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R450;R329

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉道華;夏德林;;細胞生長因子誘導骨髓基質干細胞成骨的研究進展[J];重慶醫(yī)學;2010年02期

2 鄒敬才;肖光裕;唐文杰;郭慶科;王鴻;李向黨;楊華斌;伍本德;廖際常;龐薇;;牛骨形成蛋白、微孔鈦種植體與骨界面的掃描電鏡觀察[J];口腔醫(yī)學縱橫;1993年04期

3 龐永剛,崔鵬程,陳文弦,曹云新;人骨髓間質干細胞作為骨、軟骨組織工程種子細胞的實驗研究[J];細胞與分子免疫學雜志;2004年03期

4 李樹寶;潘鋒;白欣;王幫河;丁浩;汪春蘭;何金生;張梅;趙宇;;殼聚糖介導真核雙表達質粒pIRES-hVEGF_(，

本文編號：1162981