發(fā)布時間：2017-11-09 07:03

  本文關(guān)鍵詞：人HPPCn重組蛋白可溶性表達及其增殖活性檢測

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【摘要】：HPPCn是一種新的肝細胞刺激因子,獲得較高純度的具有生物活性的HPPCn蛋白對研究其生物學(xué)功能具有重要意義。HPPCn在重組質(zhì)粒PET-24a(+)/HPPCn中,誘導(dǎo)表達產(chǎn)物主要以包涵體形式為主。為優(yōu)化表達條件,運用冷休克表達載體pColdⅡ和無縫克隆技術(shù)獲得重組質(zhì)粒pColdⅡ/HPPCn,分別對誘導(dǎo)溫度、時間、分子伴侶等誘導(dǎo)條件進行篩選,鎳離子柱親和層析純化,Western blot分析目的蛋白特異性,不同濃度人HPPCn重組蛋白(0、10、100ng/ml)刺激SMMC7721細胞,免疫細胞化學(xué)方法測定Brdu摻入、PCNA表達變化。目的蛋白在培養(yǎng)溫度為16℃,終濃度為0.1mmol/L的IPTG過夜誘導(dǎo)時為可溶性表達,最終得到人重組HPPCn蛋白純度為94.88%,人HPPCn重組蛋白可刺激SMMC7721細胞Brdu摻入增加、PCNA表達水平上調(diào),其刺激作用具有量效關(guān)系。通過冷休克表達系統(tǒng)獲得可溶性表達的人重組HPPCn蛋白,其具有促進SMMC7721細胞增殖的生物學(xué)功能,為深入研究HPPCn的作用機制提供了技術(shù)條件。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院;中國人民解放軍海軍總醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心;中國人民解放軍第148醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81472350,31071256)資助項目
【分類號】：R3416;Q786
【正文快照】： 哺乳動物肝臟在損傷后具有很強的再生能力,肝臟再生是一個復(fù)雜的過程,許多基因和細胞因子(如HGF、EGF、IL-6、TNF-α等)以不同的作用機制參與調(diào)節(jié)肝臟再生,但是這些細胞因子均缺乏特異性。1975年,La Breque等[1]首次從肝臟中發(fā)現(xiàn)能特異性刺激肝細胞增殖的物質(zhì),即肝刺激物(hepa

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