本文關(guān)鍵詞：去甲腎上腺素與CGRP對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響

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【摘要】：目的觀察去甲腎上腺素(Norepinephrine, NE)與降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)單獨(dú)使用,以及NE與CGRP混合使用對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞aB-晶體蛋自(aB-crystallin, Cryab)表達(dá)的影響。 方法(1)乳鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定。選用健康Wistar大鼠,1-3天齡,雌雄不拘,用于心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立。采用免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法對(duì)所培養(yǎng)的心肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 (2)NE對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取16孔心肌細(xì)胞,將其隨機(jī)分為四組,每組4孔(n=4)。C組,對(duì)照組；NE8組(10-8mol/L);NE7組(10-7mol/L);NE6組(10-6mol/L)。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)αB-晶體蛋白表達(dá)量。另取3孔心肌細(xì)胞采用免疫熒光雙標(biāo)法對(duì)心肌細(xì)胞中αB-晶體蛋白進(jìn)行定位檢測(cè)。 (3) CGRP對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取24孔心肌細(xì)胞,將其隨即分為六組,每組4孔(n=4)。C組;CGRP11組(10-11mol/L); CGRP10組(10-10mol/L); CGRP9組(10-9mol/L); CGRP8組(10-8mol/L);CGRP7組(10-7mol/L)。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)αB-晶狀體蛋白表達(dá)量。 (4)NE與CGRP混合對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取16孔心肌細(xì)胞,將其隨機(jī)分為四組,每組4孔(n=4)。C組;NE組(10-6mol/L);NC組(10-6mol/L NF和10-10mol/L CGRP);NC8組(10-6mol/L NE、10-10mol/LCGRP和10-9mol/LCGRP8-37)。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)aB-晶體蛋白表達(dá)量。 (5)NE與CGRP混合對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白mRNA表達(dá)的影響。取15孔心肌細(xì)胞,將其隨機(jī)分為五組,每組3孔(n=3)。C組；NE組(10-6mol/L);NC組(10-6mol/LNE和10-10mol/LCGRP);NC8組(10"6mol/L NE、10-10mol/L CGRP和10-9mol/L CGRP8-37); CGRP組(10-10mol/L)。各組給藥作用1h后采用Rt-PCR技術(shù)檢測(cè)αB-晶體蛋白mRNA表達(dá)量。 結(jié)果(1)乳鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)成功,經(jīng)檢測(cè),心肌細(xì)胞占所培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)的90%以上。 (2)正常心肌細(xì)胞中存在大量αB-晶體蛋白；且αB-晶體蛋白在心肌中主要分布于細(xì)胞核周圍,在細(xì)胞質(zhì)中亦有大量分布。 (3)與對(duì)照組(C組)比較,NE8細(xì)、NE7組、NE6組三組中Cryab的表達(dá)量均出現(xiàn)下調(diào),且以NE6組下調(diào)作用最明顯(P0.01)。 (4)與對(duì)照組(C組)比較,CGRP11組、CGRP10組、CGRP9組、CGRP8組、CGRP7組五組中Cryab的表達(dá)量均出現(xiàn)上調(diào),且這五組與C組之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。并以CGRP10組作用最明顯(P0.01)。 (5)與對(duì)照組(C組)比較,NE組Cryab的農(nóng)達(dá)出現(xiàn)了明顯下降(P0.01)；與NE組比較,NC組Cryab的表達(dá)出現(xiàn)了明顯上調(diào)(P0.05)：與NC組比較,NC8組Cryab的表達(dá)有一定的下調(diào)趨勢(shì),但不明顯(P0.05)。 (6)與對(duì)照組(C組)比較,NE組、NC組、NC8組和CGRP組Cryab mRNA的表達(dá)均出現(xiàn)了下調(diào),且以NE組、NC組最明顯(P0.05);與NE組比較,NC組Cryab mRNA的表達(dá)出現(xiàn)了輕微上調(diào),但不明顯(P0.05)；與NC組比較,NC8組Cryab mRNA的表達(dá)出現(xiàn)了輕微上調(diào),但不明顯,(P0.05)。 結(jié)論(1)NE可抑制體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞Cryab的農(nóng)達(dá)。 (2) CGRP可上調(diào)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞Cryab的表達(dá)。 (3) CGRP可在一定程度上逆轉(zhuǎn)由NE抑制的體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞Cryab的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 王濤,余志斌,謝滿江,車紅磊;新生大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)技巧[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

2 肖衛(wèi)民,袁開(kāi)宇,肖獻(xiàn)忠,尢家，

本文編號(hào)：1160682