發(fā)布時(shí)間：2017-11-07 12:12

  本文關(guān)鍵詞：人顆粒酶A活性段的表達(dá)、純化及其活性鑒定

  更多相關(guān)文章： 顆粒酶A 克隆 大腸桿菌 表達(dá) 活性測(cè)定

【摘要】：目的:克隆和表達(dá)人顆粒酶A(Granzyme A,Gzm A)基因的活性片段(active Granzyme A,a Gzm A)并進(jìn)行活性鑒定。方法:以全長(zhǎng)人Gzm A基因?yàn)槟０?PCR擴(kuò)增a Gzm A基因片段,限制性內(nèi)切酶NdeⅠ和XhoⅠ雙酶切后插入原核表達(dá)載體p ET24a(+),將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行分析。重組蛋白用鎳層析柱親和層析進(jìn)行純化后,利用BLT底物溶液進(jìn)行活性鑒定。結(jié)果:PCR擴(kuò)增得到長(zhǎng)約700 bp的基因片段。重組質(zhì)粒p ET24a-a Gzm A經(jīng)酶切和測(cè)序證實(shí)a Gzm A基因序列正確插入載體質(zhì)粒中。SDS-PAGE顯示在26 k D處有一特異性蛋白條帶。Western blot證實(shí)該蛋白可與小鼠抗His單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合。利用鎳柱親和層析法可從包涵體中純化得到純度較高的重組蛋白,且具有較好的酶活性。結(jié)論:成功制備了具有生物學(xué)活性的人顆粒酶A重組蛋白。
【作者單位】： 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81072459) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(No.NCET-12-0179) 上海大學(xué)生創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(No.KY2012-56S) 國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.1310269032)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 1本文為國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81072459)、教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(No.NCET-12-0179)、上海大學(xué)生創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(No.KY2012-56S)和國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.1310269032)資助項(xiàng)目。顆粒酶A(Granzyme A,Gzm A)是一種存在于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocy

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本文編號(hào)：1152363