本文關(guān)鍵詞：日落黃和胭脂紅酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的建立

  更多相關(guān)文章： 日落黃 胭脂紅 多克隆抗體 ELISA

【摘要】：化妝品、食品及醫(yī)藥用品中常使用人工合成色素改善其產(chǎn)品的色澤,因?yàn)榕c天然色素相比,它們價(jià)格更加低廉、色澤更穩(wěn)定,并且可以多種色素混合調(diào)色。偶氮類合成色素是合成色素中最大的一類,約占60%-70%。日落黃和胭脂紅都是常用的偶氮類合成色素,常用于藥品、化妝品、食品的著色。但由于偶氮類合成色素及其代謝物潛在的多種毒理學(xué)作用如致癌性、致突變性、肝腎毒性等越來(lái)越多地被研究證明,因此對(duì)于偶氮類合成色素作為食品添加劑使用的安全問(wèn)題越來(lái)越多地受到全世界科研工作者的重視。各國(guó)食品監(jiān)督管理組織對(duì)合成色素的使用種類和使用量都有嚴(yán)格的規(guī)定,我國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2011》對(duì)于日落黃和胭脂紅等合成色素在不同食品中的添加量也有著嚴(yán)格的規(guī)定。但食品添加劑非法使用的事件仍然頻頻發(fā)生,一些惡性事件甚至直接威脅到人民的生命安全,讓廣大消費(fèi)者對(duì)食品添加劑望而生畏。因此,我們需要開發(fā)一種實(shí)用的方法對(duì)合成色素的添加量進(jìn)行嚴(yán)格控制,從而保障人類的健康。 目前常用于日落黃和胭脂紅等偶氮類合成色素的定量測(cè)定的方法主要有高效液相色譜法、分光光度法、毛細(xì)管電泳法等,高效液相色譜法及毛細(xì)管電泳法具有操作簡(jiǎn)單、易于自動(dòng)化、檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì),但也具有檢測(cè)成本高、不利于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等劣勢(shì)。分光光度法是應(yīng)用較早的一種分析方法,它適用范圍廣、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、分析成本低,但缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度不高。本實(shí)驗(yàn)致力于開發(fā)一種靈敏、準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的分析方法對(duì)食品中的日落黃和胭脂紅色素進(jìn)行添加量檢測(cè),為食品中合成色素的質(zhì)量控制提供合理的方法。 免疫分析法的最大特點(diǎn)就是特異性很高,并且應(yīng)用范圍廣,具有操作簡(jiǎn)單、易于現(xiàn)場(chǎng)操作、靈敏度高等優(yōu)勢(shì),非常適合食品添加劑、農(nóng)藥殘留、藥物雜質(zhì)等微量物質(zhì)的檢測(cè),并且已有文獻(xiàn)報(bào)道將免疫分析法應(yīng)用于蘇丹紅、檸檬黃等合成色素的檢測(cè),得到了很高的靈敏度及極低的檢測(cè)限。本實(shí)驗(yàn)建立兩種間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法對(duì)日落黃和胭脂紅進(jìn)行定量測(cè)定。 根據(jù)日落黃及胭脂紅自身的結(jié)構(gòu)特征,本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成了其結(jié)構(gòu)類似物作為半抗原,以避免互變異構(gòu)現(xiàn)象,并且采取EDC法、混合酸酐法等常用的蛋白偶聯(lián)方法成功合成了免疫原及包被抗原。將免疫原注射到新西蘭大白兔頸背部,心臟采血后得到多克隆抗體,檢測(cè)抗體效價(jià)、方陣實(shí)驗(yàn)篩選得到合適的抗體,建立了合適的酶聯(lián)免疫分析法,建立的ELISA法具備高精密度、高準(zhǔn)確度,并能夠成功用于食品中日落黃和胭脂紅的檢測(cè)。其中日落黃測(cè)定方法的靈敏度達(dá)到0.52ng/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為y=0.44651-0.21529x,工作范圍是0.01ng/mL-10ng/mL。日落黃抗體與各種結(jié)構(gòu)相似的色素發(fā)生交叉反應(yīng)的概率與結(jié)構(gòu)相似度相關(guān),但總體交叉反應(yīng)率都很低,均在1.5%以下。在碳酸飲料、豆干、鹵肉中的檢測(cè)限分別為0.12ng/mL、0.04ng/mL、1.11ng/mL,加樣回收率均在93.21%～106.25%之間,變異系數(shù)均小于15.47%。 胭脂紅檢測(cè)方法的靈敏度為36.82ng/mL,建立方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.98155-0.15373x,工作范圍是1ng/mL-10000ng/mL。胭脂紅抗體與5種結(jié)構(gòu)相似的色素發(fā)生交叉反應(yīng)的概率均在0.3%以下,具有很高的特異性。同時(shí)對(duì)方法的精密度進(jìn)行了考察,在3天內(nèi)每天重復(fù)5次檢測(cè),得到的批內(nèi)變異系數(shù)在1.7%-6.5%之間,批間變異系數(shù)低于17.7%。本實(shí)驗(yàn)還將此方法同HPLC法進(jìn)行了對(duì)比,HPLC法標(biāo)準(zhǔn)曲線的工作濃度為40-300μg/mL,比ELISA法的線性范圍窄,兩種方法的回收率在98.82%-110.27%之間。但以上結(jié)果都是在PBS緩沖液體系中進(jìn)行的,還需要進(jìn)一步研究本方法在食品體系中的應(yīng)用。 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究,我們成功制備了日落黃和胭脂紅的半抗原及其多克隆抗體,建立了日落黃和胭脂紅定量測(cè)定的酶聯(lián)免疫分析法,為開發(fā)商品化的試劑盒奠定了良好的基礎(chǔ),并為其它合成色素酶聯(lián)免疫法的開發(fā)提供了參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林建城,林素霞;五種食用合成色素的遺傳毒理學(xué)效應(yīng)研究[J];癌變.畸變.突變;1999年02期

2 宋娟;王榕妹;王悅秋;唐雨榕;鄧安平;;半抗原的設(shè)計(jì)、修飾及人工抗原的制備[J];分析化學(xué);2010年08期

3 劉宇;謝志海;蔡清;降曉艷;;熒光光譜法測(cè)定飲料中的日落黃[J];分析科學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

4 馬康;蔣孝雄;趙敏;蔡冶強(qiáng);;高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定軟飲料中20種食品添加劑[J];分析化學(xué);2012年11期

5 周琪,趙由才;染料對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境的危害[J];環(huán)境與健康雜志;2005年03期

6 徐加發(fā);成義祥;沈萍萍;;半抗原設(shè)計(jì)合成研究進(jìn)展[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2009年05期

7 赫春香;楊晶;;日落黃分子印跡電化學(xué)傳感器的研制與應(yīng)用[J];遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年01期

8 任立松;盧士英;周玉;郭德軍;李巖松;孟憲梅;柳增善;;檸檬黃色素免疫學(xué)檢測(cè)方法的研究[J];食品科學(xué);2009年12期

9 杜建中;董柳余;金蓓;;高聚物萃取-光度法測(cè)定水果硬糖中色素的含量[J];食品科學(xué);2012年18期

10 端禮榮，，李君榮，邢光偉，陳健美;混合食用色素對(duì)雄性小鼠生殖細(xì)胞遺傳性損傷的初步觀察[J];鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年02期

本文編號(hào)：1152159