本文關(guān)鍵詞：鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)在白念珠菌氧化壓力應(yīng)答中的功能研究

  更多相關(guān)文章： 白念珠菌 Ecm7 CaMKs 鈣穩(wěn)態(tài) 氧化壓力 CWI 毒力

【摘要】：作為人類主要的條件性致病真菌,白念珠菌在侵染人體時(shí)會(huì)引起機(jī)體的一系列功能障礙,而免疫抑制藥物的廣泛使用更使該致病菌引起的感染逐年上升,關(guān)于該致病菌的致病機(jī)制亟需研究。 類似于其他真核生物,白念珠菌利用自身保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來應(yīng)對(duì)外界壓力,而鈣信號(hào)途徑更是在這方面發(fā)揮重要作用。外界刺激會(huì)引起菌體內(nèi)Ca2+濃度的變化,進(jìn)而起始菌體參與應(yīng)對(duì)外界環(huán)境壓力。鈣調(diào)素是真核細(xì)胞鈣信號(hào)途徑中的一個(gè)主要調(diào)控蛋白。胞漿內(nèi)鈣離子濃度的升高會(huì)促使鈣調(diào)素同鈣離子結(jié)合,進(jìn)而控制菌體內(nèi)參與代謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵酶的活性。釀酒酵母中,鈣離子/鈣調(diào)素作用靶點(diǎn)主要是鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶及Ⅱ型鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶(type Ⅱ Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases, CaMKs)。 CaMKs調(diào)節(jié)的磷酸化過程是生物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)過程中的關(guān)鍵步驟,涉及廣泛的生理過程。到目前為止,盡管白念珠菌鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)中的許多成員已為人們所熟知,但仍有許多代謝調(diào)控機(jī)制亟需探討。本研究主要包括以下內(nèi)容： (1)通過BLASTP分析,本研究在白念珠菌中鑒定出了釀酒酵母同源ECM7基因。通過構(gòu)建ecm7△/△缺失株,本研究發(fā)現(xiàn)Ecm7作為高親和性鈣離子內(nèi)流系統(tǒng)(high affinity Ca2+influx system,HACS)的一個(gè)潛在調(diào)控因子,在菌體維持鈣離子穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用,同時(shí)發(fā)現(xiàn)Midl是Ecm7穩(wěn)定性維持所必需的。ECM7基因的缺失能夠?qū)е戮w對(duì)低鈣環(huán)境的敏感性,同樣導(dǎo)致菌體在堿性刺激下胞外鈣離子內(nèi)流減少。免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步指出,Cchl及Midl的缺失并不影響Ecm7的表達(dá),但Midl的缺失能顯著降低Ecm7的穩(wěn)定性。此外,ecm7△/△菌株對(duì)氧化壓力表現(xiàn)出高度的敏感性。ECM7基因的缺失不僅使菌體內(nèi)參與氧化壓力應(yīng)答基因的表達(dá)下調(diào),而且顯著降低Capl的穩(wěn)定性。本研究還發(fā)現(xiàn),ECM7基因的缺失能導(dǎo)致菌體菌絲發(fā)育缺陷,同時(shí)伴隨著菌體內(nèi)HWP1表達(dá)的下調(diào)。鑒于白念珠菌的致病性同其菌絲發(fā)育密切相關(guān),本研究進(jìn)一步進(jìn)行小鼠毒力實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,ECM7基因的缺失并不影響菌體對(duì)小鼠的毒力,但卻導(dǎo)致菌體對(duì)小鼠腎臟的侵襲力及擴(kuò)散能力顯著降低。 (2)為了進(jìn)一步研究鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)在白念珠菌應(yīng)對(duì)外界環(huán)境壓力中的作用,本研究構(gòu)建了CaMK缺失株。結(jié)果表明,CaMKs在維持菌體細(xì)胞壁完整性(cellwall integrity, CWI)及調(diào)控胞內(nèi)還原狀態(tài)方面發(fā)揮重要作用。在熒光增白劑(CFW)作用下,CMK1,CMK2單基因或雙基因的缺失能激活CWI,使CWI相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。此外,CaMKs參與菌體內(nèi)氧化還原狀態(tài)的調(diào)控。CaMK單基因或雙基因的缺失不僅導(dǎo)致菌體內(nèi)ROS含量增多,而且還導(dǎo)致菌體線粒體膜電勢(shì)的下降,這表明CaMKs在菌體線粒體正常功能的發(fā)揮方面發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R379.4

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李煒;江米足;;緊密連接蛋白與幽門螺桿菌感染相關(guān)性胃病的關(guān)系研究[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2014年03期

2 李文娟;李倩;祁曉翔;尚朝;周子睿;施志儀;;三角帆蚌鈣調(diào)蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆與表達(dá)分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年22期

3 王丹;陳亮;;茶樹對(duì)茶尺蠖抗性機(jī)制研究[J];茶葉科學(xué);2014年06期

4 張德全;夏志寬;田艷麗;廖勇;呂雪蓮;陳衛(wèi);王聰敏;楊蓉婭;;阿薩希毛孢子菌氟康唑體外誘導(dǎo)耐藥的方法優(yōu)化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年24期

5 王萍;董群;;小鼠系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年11期

6 張欣;蘇雯靜;李巍;安金剛;劉斌;韓驊;劉玉峰;;單克隆天然抗體3B4抑制白念珠菌芽管形成的機(jī)制初探[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2007年01期

7 廖璞,程海平;白色念珠菌致病性研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2005年04期

8 嚴(yán)蕾;唐建國(guó);;假絲酵母黏附相關(guān)糖基磷脂酰肌醇錨定細(xì)胞壁蛋白的研究進(jìn)展[J];微生物與感染;2013年03期

9 王德;黃欣;趙力瀾;趙敬軍;;白念珠菌MAPK信號(hào)通路研究進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2013年04期

10 李小悅;黃順偉;陳娟;江智毅;管向東;;烏司他丁聯(lián)合抗真菌藥物治療侵襲性念珠菌感染的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版);2013年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁勇;白念珠菌高鐵還原酶基因表達(dá)調(diào)控及Aft2p轉(zhuǎn)錄因子的功能研究[D];南開大學(xué);2010年

2 黃峰;細(xì)胞凋亡效應(yīng)酶在牛肉成熟過程中的作用機(jī)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 馬國(guó)林;早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子3基因轉(zhuǎn)染精神分裂大鼠的多模態(tài)功能磁共振成像研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 張?zhí)靾@;柑橘綠霉病菌轉(zhuǎn)錄因子PacC、Crz1及蛋白激酶SNF1的功能分析[D];浙江大學(xué);2013年

5 程敏;干擾素調(diào)節(jié)的miRNA表達(dá)譜及其抗HCV機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 都浩;水稻中激素和肌醇磷酸代謝相關(guān)基因的抗逆功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 王莎;構(gòu)巢曲霉高親和性鈣離子吸收系統(tǒng)參與生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控的機(jī)制研究[D];南京師范大學(xué);2013年

8 劉繼棟;代謝工程改造釀酒酵母生產(chǎn)單萜的關(guān)鍵問題解析[D];江南大學(xué);2013年

9 曹讓;棉花幼苗γ-氨基丁酸代謝及對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)[D];石河子大學(xué);2013年

10 李世勇;線粒體動(dòng)力學(xué)異常在異氟烷致發(fā)育期大鼠神經(jīng)元毒性中作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1145493