本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲吡喹酮抗性株的生物學(xué)特性及免疫病理的研究

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【摘要】：血吸蟲�。⊿chistosomiasis）是一種嚴(yán)重危害人類健康、影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大傳染病，被世界衛(wèi)生組織（WHO）列為10種被忽視的熱帶病之一。目前，全球共有76個(gè)國家和地區(qū)流行血吸蟲病，感染者超過2億，近8億人口面臨感染威脅，患者約2000萬。吡喹酮作為一種高效低毒口服的廣譜抗寄生蟲藥，不僅對(duì)人體的五種血吸蟲病都有效，而且療效高，療程短（1-2天），不良反應(yīng)少，使用方便，治療的覆蓋面大，被WHO推薦為抗血吸蟲治療的首選口服藥物。 但是同一種藥物因?yàn)檫^度使用、使用劑量不足以及其他一些因素，往往會(huì)導(dǎo)致病原體抗藥性的產(chǎn)生。長期、大量、反復(fù)的使用吡喹酮治療血吸蟲病，是否會(huì)導(dǎo)致血吸蟲對(duì)吡喹酮抗藥性的產(chǎn)生，已引起廣泛關(guān)注。1994年，F(xiàn)allon和Doenhoff在室內(nèi)采用亞治療劑量吡喹酮誘導(dǎo)出曼氏血吸蟲吡喹酮抗性株，證實(shí)在藥物選擇壓力下，曼氏血吸蟲可對(duì)吡喹酮產(chǎn)生抗性。在中國流行的是日本血吸蟲。自1980年吡喹酮問世以來，吡喹酮是中國流行區(qū)現(xiàn)場(chǎng)使用的唯一抗血吸蟲藥物。雖然在中國尚未發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲流行區(qū)對(duì)吡喹酮產(chǎn)生抗性的直接證據(jù)，但在流行區(qū)易感人群中已發(fā)現(xiàn)有“久治不愈”的病例。鑒于我國流行區(qū)服用吡喹酮面廣量大，反復(fù)使用吡喹酮頻率的增加，以及吡喹酮?jiǎng)┝坎蛔愕母怕氏鄬?duì)增多，日本血吸蟲是否會(huì)在長期亞治療劑量吡喹酮的藥物篩選壓力下出現(xiàn)抗性株引發(fā)了大量關(guān)注。 2012年本課題組在實(shí)驗(yàn)室采用吡喹酮亞治療劑量，在小鼠體內(nèi)經(jīng)十?dāng)?shù)代誘導(dǎo)篩選誘導(dǎo)出兩株日本血吸蟲吡喹酮抗性株，證明在吡喹酮壓力下日本血吸蟲可以產(chǎn)生抗性。因此，研究實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)日本血吸蟲吡喹酮抗性株的生物學(xué)特性及免疫病理差異，比較遺傳背景相一致的吡喹酮抗性株和敏感株日本血吸蟲的生物學(xué)特性及免疫病理差異，建立日本血吸蟲吡喹酮抗性株的生物學(xué)特征指標(biāo)，掌握日本血吸蟲吡喹酮抗性株在中間宿主和終宿主體內(nèi)的傳播能力及致病性，從而為日本血吸蟲吡喹酮抗性株的種群生物學(xué)、傳播動(dòng)力學(xué)及流行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估奠定基礎(chǔ)。這對(duì)于研究吡喹酮抗血吸蟲作用機(jī)制、血吸蟲吡喹酮抗性機(jī)制和制定相關(guān)的血吸蟲病防控策略均有重大的理論和實(shí)際意義。 本研究內(nèi)容主要包括如下三個(gè)部分。 1日本血吸蟲吡喹酮抗性株在終宿主-小鼠體內(nèi)的生物學(xué)特性 目的：比較日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株在終宿主小鼠體內(nèi)各發(fā)育階段的生物學(xué)特性的差異。 方法：采用遺傳背景相同（來自于同一種群，本實(shí)驗(yàn)為兩個(gè)種群，一為日本血吸蟲中國大陸江蘇株，另一為日本血吸蟲中國大陸湖南株）后在小鼠體內(nèi)通過暴露于亞治療劑量吡喹酮方式經(jīng)多輪誘導(dǎo)篩選出的，對(duì)吡喹酮具有一定抗性的日本血吸蟲株和與抗性株對(duì)應(yīng)的，經(jīng)相同輪數(shù)傳代但未經(jīng)吡喹酮篩選的敏感蟲株為觀察蟲株，共2對(duì)4株。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分別收集各蟲株的尾蚴，感染小鼠，建立小鼠-釘螺-小鼠生活史循環(huán)，系統(tǒng)觀察比較各蟲株蟲卵開放前期、糞便產(chǎn)卵量、對(duì)終宿主的易感性、蟲卵在終宿主體內(nèi)的分布和蟲體生長發(fā)育等生物學(xué)特性。 結(jié)果：在小鼠感染40條尾蚴后，江蘇吡喹酮敏感株和抗性株的蟲卵開放前期分別為36.1天和36.8天（P=0.317）；感染后41、42、43天，100mg糞便平均蟲卵數(shù)為14.6個(gè)和21.2個(gè)（P=0.007）；感染后46天，，成蟲回收條數(shù)為20.5條/鼠和25.1條/鼠（P=0.042）；組織蟲卵數(shù)分別為31303個(gè)/對(duì)成蟲和38594個(gè)/對(duì)成蟲（P=0.040）；肝臟蟲卵數(shù)為14810個(gè)/對(duì)成蟲和19715個(gè)/對(duì)成蟲（P=0.007）；腸組織蟲卵數(shù)為16493個(gè)/對(duì)成蟲和18879個(gè)/對(duì)成蟲（P=0.309）；敏感株和抗性株合抱體的體長（P=0.744）、雌蟲體長（P=0.701）、雄蟲體長（P=0.741）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在小鼠感染40條尾蚴后，湖南吡喹酮敏感株和抗性株的蟲卵開放前期分別為35.5天和35.6天（P=0.867）；感染后41、42、43天，100mg糞便平均蟲卵數(shù)為13.3個(gè)和18.9個(gè)（P=0.001）；感染后46天，成蟲回收條數(shù)為17.6條/鼠和25.1條/鼠（P=0.004）；組織蟲卵數(shù)為30932個(gè)/對(duì)成蟲和53903個(gè)/對(duì)成蟲（P0.001）；肝臟蟲卵數(shù)為12307個(gè)/對(duì)成蟲和26363個(gè)/對(duì)成蟲（P0.001）；腸組織蟲卵數(shù)為18625個(gè)/對(duì)成蟲和27541個(gè)/對(duì)成蟲（P=0.007）；敏感株和抗性株合抱體的體長（P=0.397）、雌蟲體長（P=0.784）、雄蟲體長（P=0.461）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：與敏感株的比較顯示，日本血吸蟲吡喹酮抗性蟲株的成蟲回收率高于敏感株，提示其對(duì)終宿主的易感性更強(qiáng)；抗性蟲株的產(chǎn)卵量和肝臟組織蟲卵沉積量均明顯高于敏感株，提示其對(duì)宿主的致病性更強(qiáng)；抗性株感染鼠糞便中排出蟲卵數(shù)明顯高于敏感株感染鼠，則提示吡喹酮抗性蟲株的傳播能量高于敏感株，在流行病學(xué)上有意義。 2日本血吸蟲吡喹酮抗性株在中間宿主-釘螺體內(nèi)的生物學(xué)特性 目的：實(shí)驗(yàn)比較日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株在中間宿主釘螺體內(nèi)生活階段的生物學(xué)特性的差異。 方法：采用遺傳背景相同（來自于同一種群，本實(shí)驗(yàn)為兩個(gè)種群，一為日本血吸蟲中國大陸江蘇株，另一為日本血吸蟲中國大陸湖南株）后在小鼠體內(nèi)通過暴露于亞治療劑量吡喹酮方式經(jīng)多輪誘導(dǎo)篩選出的，對(duì)吡喹酮具有一定抗性的日本血吸蟲株和與抗性株對(duì)應(yīng)的，經(jīng)相同輪數(shù)傳代但未經(jīng)吡喹酮篩選的敏感蟲株為觀察蟲株，共2對(duì)4株。用抗性株和敏感株尾蚴感染小鼠，感染37天后分別收集各蟲株蟲卵孵化毛蚴，以各蟲株毛蚴定量感染釘螺，中間宿主體內(nèi)觀察比較各蟲株對(duì)螺的感染率、感染性螺存活期、尾蚴開放前期和各螺的產(chǎn)尾蚴量。結(jié)果：一個(gè)毛蚴感染一個(gè)釘螺，江蘇敏感株和江蘇抗性株對(duì)螺的感染率分別為8.99%和19.74%，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.047)；湖南敏感株和湖南抗性株對(duì)螺的感染率分別為10.00%和21.52%，二者間差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046)；江蘇敏感株和江蘇抗性株的平均產(chǎn)尾蚴量分別為1460.2個(gè)和1039.3個(gè)，二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.020)；湖南敏感株和湖南抗性株的平均產(chǎn)尾蚴量分別為1319.4個(gè)和1003.5個(gè)，二者間差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017)。日本血吸蟲吡喹酮抗性株的尾蚴開放前期和感染性釘螺存活率與敏感株無差異。結(jié)論：日本血吸蟲吡喹酮抗性株的對(duì)螺感染率高于敏感株，而平均產(chǎn)尾蚴量則低于敏感株，這些改變可能是與吡喹酮抗性產(chǎn)生相關(guān)。 3日本血吸蟲吡喹酮抗性株感染鼠的肝臟蟲卵肉芽腫及血清學(xué)反應(yīng) 目的：實(shí)驗(yàn)研究吡喹酮體內(nèi)用藥對(duì)日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株肝臟蟲卵肉芽腫的影響以及日本血吸蟲吡喹酮抗性株的血清學(xué)反應(yīng)與敏感株的差異。 方法：將小鼠隨機(jī)分為八組，用2株日本血吸蟲吡喹酮抗性株和2株日本血吸蟲吡喹酮敏感株尾蚴分別感染各組小鼠，其中四組小鼠于感染后第35天以150mg/kg吡喹酮灌胃治療小鼠，治療兩周后剖殺取肝臟。另四組小鼠未用藥，于感染42天后剖殺取肝臟。各組小鼠肝臟用做石蠟切片，進(jìn)行HE染色，以圖像分析儀定量測(cè)定蟲卵肉芽腫的面積和周長。未治療組小鼠解剖前采集血液分離血清，作血清學(xué)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：未作治療組的日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株感染的小鼠肝臟中蟲卵肉芽腫面積、周長均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療組的日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株感染的小鼠肝臟中蟲卵肉芽腫面積、周長均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。日本血吸蟲吡喹酮抗性株環(huán)卵沉淀反應(yīng)、毛蚴制動(dòng)實(shí)驗(yàn)、尾蚴膜反應(yīng)等血清學(xué)反應(yīng)強(qiáng)度與敏感株無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均0.05）。 結(jié)論：經(jīng)吡喹酮體內(nèi)用藥，日本血吸蟲吡喹酮抗性株感染鼠蟲卵肉芽腫面積大于敏感株肝臟蟲卵肉芽腫；提示在肝組織中，日本血吸蟲吡喹酮敏感株蟲卵對(duì)吡喹酮敏感性高于抗性株。血吸蟲抗性蟲株和敏感蟲株感染鼠血清與敏感株成熟蟲卵滲出的抗原，毛蚴、尾蚴的體表抗原的反應(yīng)水平并無差異，說明這些抗原在日本血吸蟲吡喹酮抗性株和敏感株間無明顯差異。
【學(xué)位授予單位】：江蘇省血吸蟲病防治研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R383.24

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