本文關(guān)鍵詞：缺血后處理啟動細胞周期促進受損心肌組織修復(fù)的研究

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【摘要】：目的：缺血后處理(IschemiaPostconditioning,IPO)作為一種內(nèi)源性保護機制，已經(jīng)證明可以有效抑制心肌細胞的凋亡，但是否還可以通過誘導(dǎo)細胞增殖，修復(fù)受損的心肌組織尚不清楚。本研究通過建立大鼠缺血后處理模型，觀察細胞增殖指標Ki67、H3P和細胞周期蛋白cyclins和CDKs的變化，，研究IPO能否通過啟動細胞周期，誘導(dǎo)心肌細胞的增殖，進而補償受損心肌組織。 方法： 1、模型的建立。健康成年雄性8周齡(220±25g)SD大鼠，隨機分為3組：假手術(shù)組(Shamoperation,Sham)、缺血再灌注組(Ischemia/Reperfusion,I/R)、缺血后處理組(IschemicPostconditioning,IPO)。分別于術(shù)后1天、3天、7天和14天檢測相關(guān)指標。 2、血流動力學(xué)指標的測定。分別記錄術(shù)后各時間點血流動力學(xué)指標：左室舒張末期壓(LVEDP)、左室收縮壓(LVSP)、左室等容期上升最大速率(+dp/dtmax)和左室等容期下降最大速率(-dp/dtmax)。 3、心肌組織細胞增殖指標Ki67和H3P的檢測。分別采用免疫組化SABC法和免疫熒光雙標染色法檢測術(shù)后各時間點Ki67和H3P的表達情況，并隨機選取十個視野進行陽性單位和陽性細胞數(shù)的統(tǒng)計。 4、心肌組織細胞周期cyclins和CDKs的檢測。 (1)mRNA水平運用RT-PCR法檢測術(shù)后各時間點細胞周期蛋白(cyclinA、B、D、E)和細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK1、2、4、6)的表達，并進行灰度比值分析； (2)蛋白水平運用WesternBlot法檢測術(shù)后各時間點cyclinA2和cyclinB的表達水平，并進行灰度比值分析； (3)組織水平運用免疫組化SABC法和免疫熒光雙標染色法檢測術(shù)后各時間點cyclinA2和cyclinB的表達，并隨機選取十個視野進行陽性單位和陽性細胞數(shù)的統(tǒng)計。 結(jié)果： 1、模型的建立。缺血過程中ST段抬高，表明缺血成功；當血液恢復(fù)再灌，ST段恢復(fù)至正常。 2、血流動力學(xué)指標的變化。術(shù)后各時間點IPO、I/R組LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯低于Sham組(P0.05)，同時LVEDP明顯高于Sham組(P0.05)。與I/R組比較，IPO干預(yù)后各時間點LVSP及±dp/dtmax均升高(P0.05)，而LVEDP有下降趨勢。 3、心肌細胞增殖指標Ki67和H3P的檢測結(jié)果。 (1)免疫組化SABC法檢測Ki67、H3P的表達結(jié)果：在心肌組織中散在分布，染色呈棕色的為陽性細胞。Sham組陽性細胞極少，IPO組和I/R組陽性細胞在術(shù)后各時間點均有不同程度的增多。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示：術(shù)后各時間點與Sham組比較，IPO組陽性單位顯著增多具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，并且觀察到正在分裂的心肌細胞。與I/R組比較，IPO組Ki67陽性單位在術(shù)后第3天和7天具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，而H3P在術(shù)后第3天具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 (2)免疫熒光雙標染色法檢測Ki67、H3P的表達結(jié)果：術(shù)后各時間點IPO組陽性細胞數(shù)與Sham組比較，在術(shù)后第1天、3天和7天有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；術(shù)后第3天、7天IPO組和I/R組比較也具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，可能與免疫熒光雙標染色法檢測靈敏度高有關(guān)。 4、心肌組織細胞周期cyclins和CDKs的檢測結(jié)果。 (1)mRNA水平檢測cyclinA、B、D、E和CDK1、2、4、6的表達結(jié)果：cyclinA2和cyclinB：IPO組和I/R組cyclinA2和cyclinB表達水平在術(shù)后各時間點均顯著高于Sham組(P0.05)，且分別在術(shù)后3天和7天達到峰值。cyclinD：與Sham組比較，I/R組cyclinD表達水平在術(shù)后1天和7天具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，而IPO組cyclinD表達量分別在術(shù)后1天，3天和7天具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。與I/R組比較，IPO組在術(shù)后第3天表達量具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 cyclinE：與Sham組比較，IPO組cyclinE表達水平分別在術(shù)后1天，3天和7天具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。組間比較，IPO組和I/R組cyclinE表達水平分別在術(shù)后3天，7天和14天具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。CDK1：與Sham組比較，IPO組和I/R組CDK1表達水平在術(shù)后各時間點具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。組間比較，術(shù)后3天和7天有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 CDK2：與Sham組比較，I/R組CDK2表達水平在術(shù)后3天和7天具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，而IPO組CDK2表達水平分別在術(shù)后1天，3天和7天具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 CDK4和CDK6表達量各組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。 (2)蛋白水平檢測cyclinA2和cyclinB的表達結(jié)果。cyclinA2和cyclinB在Sham組幾乎沒有表達。IPO和I/R組術(shù)后各時間點表達量均有顯著增加(P0.05)。IPO與I/R組比較，cyclinA2表達水平在術(shù)后1天，3天和7天均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。cyclinB結(jié)果與之相同。 (3)組織水平檢測cyclinA2和cyclinB的表達結(jié)果 免疫組化SABC法檢測cyclinA2和cyclinB的表達結(jié)果：Sham組cyclinA2、cyclinB陽性細胞數(shù)很少，IPO組和I/R組陽性細胞明顯增多。統(tǒng)計學(xué)分析表明：cyclinA2IPO組陽性單位在術(shù)后第1天、3天和7天顯著大于Sham組，且在術(shù)后3天與I/R組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；cyclinBIPO組陽性單位在術(shù)后各時間點顯著大于Sham組，且在術(shù)后第1天、3天和7天與I/R組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 免疫熒光雙標染色法檢測cyclinA2和cyclinB的表達結(jié)果：cyclinA2術(shù)后各時間點Sham組cyclinA2陽性細胞數(shù)顯著少于IPO組和I/R組(P0.05)。組間比較，術(shù)后1天，3天和7天陽性細胞數(shù)具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，且IPO組陽性細胞數(shù)在3天達到峰值(P0.05)；cyclinB術(shù)后第1天、3天和7天IPO組陽性細胞數(shù)顯著大于Sham組(P0.05)。組間比較，術(shù)后3天和7天陽性細胞數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)差異，且IPO組陽性細胞數(shù)在3天達到峰值(P0.05)。 結(jié)論： 1、IPO可有效改善心功能。 2、免疫組化SABC法和免疫熒光雙標染色法均證明IPO可以誘導(dǎo)細胞增殖特異性指標Ki67和H3P的表達，并且觀察到正在分裂的心肌細胞。 3、IPO誘導(dǎo)成年期保持沉默的cyclinA2基因的表達，進而其它cyclins及CDKs的表達增加。 4、IPO可以啟動心肌組織相關(guān)cyclins和CDKs的表達，可能通過心肌細胞的增殖補償或修復(fù)受損的心肌組織。
【關(guān)鍵詞】：缺血后處理 心肌組織 細胞周期 增殖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 文略縮詞表6-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-16
• 前言16-20
• 第一部分 缺血后處理模型的建立20-26
• 引言20
• 1、材料與方法20-23
• 1.1 主要試劑與儀器20-21
• 1.2 實驗方法21-23
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)方法23
• 2、結(jié)果23-24
• 2.1 模型的建立與鑒定23-24
• 2.2 術(shù)后不同時間點血流動力學(xué)變化24
• 3、討論24-26
• 第二部分 缺血后處理對心肌組織細胞增殖指標Ki67、H3P的研究26-32
• 引言26
• 1、材料與方法26-29
• 1.1 主要試劑與儀器26-28
• 1.2 實驗方法28-29
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)方法29
• 2、結(jié)果29-30
• 2.1 免疫組化SABC法檢測細胞增殖標記物Ki67、H3P的表達29-30
• 2.2 免疫熒光雙標染色法檢測Ki67、H3P的表達30
• 3、討論30-32
• 第三部分 缺血后處理對心肌組織細胞周期cyclins和CDKs的影響32-46
• 引言32
• 1、材料與方法32-42
• 1.1 主要試劑與儀器32-36
• 1.2 實驗方法36-42
• 2、結(jié)果42-43
• 2.1 mRNA水平cyclinA、B、D、E和CDK1、2、4、6的表達42
• 2.2 蛋白水平cyclinA2和cyclinB的表達42-43
• 2.3 組織水平檢測cyclinA2和cyclinB的表達43
• 3、討論43-46
• 小結(jié)46-47
• 參考文獻47-55
• 綜述55-67
• 參考文獻61-67
• 附錄67-76
• 致謝76-77
• 個人簡介77

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1134052