本文關(guān)鍵詞：健康志愿者唾液中唾液酸化糖蛋白N-糖鏈譜的分析

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【摘要】：唾液作為人體抵御呼吸道病毒感染的第一道天然屏障,其中的糖蛋白發(fā)揮著重要的作用,如唾液中的α-2巨球蛋白,粘蛋白5B和唾液糖蛋白340等可通過其上末端唾液酸(Sialic acid, SA)糖鏈受體與流感病毒表面糖蛋白血凝素(Hemagglutinin, HA)結(jié)合以中和并抑制流感病毒的感染。流感病毒HA特異識別宿主細胞表面上的SA糖鏈受體,其中人流感病毒HA主要識別末端為SAα2-6半乳糖(Galactose, Gal)(SAa2-6Ga1)的糖鏈受體,而禽流感病毒HA主要識別末端為SAα2-3Gal的糖鏈受體。本實驗室前期對三個年齡段健康志愿者的唾液進行了分析,發(fā)現(xiàn)了一些與年齡和性別相關(guān)的唾液糖蛋白糖鏈,如隨著年齡的增長,唾液糖蛋白上的SA糖鏈表達量明顯增多,而其蛋白質(zhì)表達量并無顯著改變。同時發(fā)現(xiàn)健康老年人唾液通過提供更多的a2-3和a2-6連接末端SA糖鏈結(jié)構(gòu)與HA結(jié)合,中和并抑制流感病毒對人體上呼吸道細胞表面特異受體的相互識別,使健康老年人具有更強抵抗流感的能力。 本實驗希望能更進一步研究唾液中唾液酸化糖鏈的具體結(jié)構(gòu),了解不同年齡段不同性別之間的唾液酸糖鏈結(jié)構(gòu)的差異。本實驗使用凝集素SNA/MAL-Ⅱ-磁性微粒復(fù)合物,按年齡(老年、成年、兒童)和性別不同分別對健康志愿者唾液樣本進行分離。其中凝集素SNA主要是別末端SAα2-6Gal連接的糖鏈,凝集素MAL-Ⅱ主要是別末端SAα2-3Gal連接的糖鏈。將這兩種凝集素富集得到的唾液酸化糖蛋白經(jīng)糖苷酶PNGaseF處理獲取其上全部N-糖鏈,純化除鹽后通過MADLI-TOF/TOF-MS對得到的糖鏈進行鑒定。 對數(shù)據(jù)進行分析、統(tǒng)計,結(jié)果如下： (1)凝集素SNA提取的糖蛋白糖鏈。 老年男性及女性唾液中分別鑒定到43個和27個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為30個和18個。在成年男性及女性中分別鑒定到20個和26個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為13個和21個。在兒童男性及女性中,共鑒定到32個和34個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為25個和26個。在兒童男性及女性中的大分子糖鏈,相比成年男性女性和老年男性女性較少。有的糖鏈在6組樣本中都存在,而有的糖鏈只存在于個別樣本。并且同一年齡段不同性別之間糖鏈也有不同,老年人中糖鏈結(jié)構(gòu)豐富。 (2)凝集素MAL-Ⅱ提取的老年男性及女性唾液中各鑒定到37個和33個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為26個和25個。在成年男性及女性中各鑒定到24個和28個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為19個和22個。在兒童男性及女性中,各鑒定到17個和20個糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸化的糖鏈結(jié)構(gòu)分別為16個和17個。其中,老年人中鑒定到的糖鏈總數(shù)和唾液酸化的糖鏈數(shù)均為最多。 縱觀整個糖鏈譜圖,經(jīng)凝集素分離的唾液中末端唾液酸化修飾的N-連接糖鏈主要分布在1300-3500Da之間,鑒定到了一些大分子糖鏈。其中老年人中鑒定到的糖鏈類型較豐富,并且在MAL-Ⅱ識別的糖鏈中,老年人組中鑒定到的糖鏈和唾液酸糖鏈個數(shù)最多,這可能揭示了老年人唾液具有更強的抵抗禽流感病毒能力的原因。此外,質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析結(jié)果還顯示,相同年齡段性別不同其糖鏈也有所不同。相比老年人和成年人,兒童的大分子糖鏈較少。
【關(guān)鍵詞】：唾液 糖蛋白 凝集素 質(zhì)譜技術(shù) 糖鏈結(jié)構(gòu)
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略表7-11
• 第一章 緒論11-24
• 1.1 糖組學11-18
• 1.1.1 糖蛋白定義及主要類型11-13
• 1.1.2 糖蛋白的生物學作用13
• 1.1.3 糖組學中糖鏈的功能及特點13-14
• 1.1.4 糖鏈的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定14-16
• 1.1.5 質(zhì)譜技術(shù)在糖組學中的應(yīng)用16-18
• 1.2 唾液蛋白質(zhì)組學18-21
• 1.2.1 唾液化學組成和生理功能18-19
• 1.2.2 唾液與疾病的相關(guān)性研究19-21
• 1.3 唾液酸與唾液酸糖鏈21-22
• 1.3.1 唾液酸的主要結(jié)構(gòu)21
• 1.3.2 唾液酸糖鏈的生物學功能21-22
• 1.4 本研究的目的及意義22-24
• 第二章 凝集素SNA提取的健康志愿者唾液糖蛋白N-糖鏈譜的分析24-42
• 2.1 引言24
• 2.2 實驗部分24-27
• 2.2.1 主要試劑與材料24-25
• 2.2.2 實驗儀器25-26
• 2.2.3 溶液配制26-27
• 2.3 實驗方法27-31
• 2.3.1 唾液的采集27
• 2.3.2 唾液蛋白的處理27
• 2.3.3 唾液蛋白的Bradford定量27
• 2.3.4 凝集素SNA-磁性微粒復(fù)合物的制備27-28
• 2.3.5 SNA識別的唾液酸化糖蛋白的分離純化28
• 2.3.6 純化糖蛋白的SDS-PAGE鑒定28-30
• 2.3.7 糖鏈的釋放30
• 2.3.8 糖鏈的純化30-31
• 2.3.9 糖鏈的MALDI-TOF/TOF-MS解析31
• 2.4 實驗結(jié)果31-40
• 2.4.1 唾液蛋白的Bradford定量31-32
• 2.4.2 磁性微粒的偶聯(lián)率的計算32-33
• 2.4.3 SDS-PAGD電泳結(jié)果33-34
• 2.4.4 N-糖鏈的MALDI-TOF-MS一級圖譜34-35
• 2.4.5 N-糖鏈串聯(lián)質(zhì)譜的解析35-40
• 2.5 小結(jié)40-42
• 第三章 凝集素MAL-Ⅱ提取的健康志愿者唾液糖蛋白N-糖鏈譜分析42-59
• 3.1 引言42
• 3.2 實驗部分42-45
• 3.2.1 試劑與材料42-43
• 3.2.2 實驗儀器43-44
• 3.2.3 溶液配制44-45
• 3.3 實驗方法45-49
• 3.3.1 唾液的采集45
• 3.3.2 唾液蛋白的處理45
• 3.3.3 唾液蛋白的Bradford定量45
• 3.3.4 凝集素MAL-Ⅱ-磁性微粒復(fù)合物的制備45-46
• 3.3.5 MAL-Ⅱ識別的唾液酸化糖蛋白的分離純化46
• 3.3.6 純化糖蛋白的SDS-PAGE鑒定46-48
• 3.3.7 糖鏈的釋放48
• 3.3.8 糖鏈的純化48-49
• 3.3.9 糖鏈的MALDI-TOF/TOF-MS解析49
• 3.4 實驗結(jié)果與小結(jié)49-57
• 3.4.1 唾液蛋白的Bradford定量49-50
• 3.4.2 磁性微粒的偶聯(lián)率的計算50-51
• 3.4.3 SDS-PAGD電泳結(jié)果51
• 3.4.4 N-糖鏈的MALDI-TOF-MS一級圖譜51-52
• 3.4.5 N-糖鏈串聯(lián)質(zhì)譜的解析52-57
• 3.5 小結(jié)57-59
• 全文總結(jié)59-61
• 參考文獻61-69
• 致謝69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 任姝萍;糖蛋白與疾病的研究進展[J];合肥學院學報(自然科學版);2004年04期

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本文編號：1131370