本文關鍵詞：人FcγRIIB慢病毒表達載體的制備及其功能初步研究

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【摘要】：目的構建人FcγRⅡB慢病毒誘導表達載體，檢測人FcγRⅡB慢病毒誘導表達載體在HT-1080細胞表面可調控的穩(wěn)定表達，并初步研究其對B細胞功能的影響。 方法以人mRNA為模版逆轉錄獲得FcγRⅡB基因片段，并將其克隆入慢病毒表達質粒TRE，構建TRE-FcγRⅡB慢病毒表達重組質粒。將慢病毒表達重組質粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒調節(jié)質粒Tet分別與慢病毒包裝質粒共轉染HEK293T細胞，分別包裝表達病毒和調節(jié)病毒，分別測定表達病毒和調節(jié)病毒感染滴度。表達病毒和調節(jié)病毒共感染HT-1080細胞，經梯度濃度強力霉素（Dox）誘導，免疫熒光染色檢測HT-1080細胞表達FcγRⅡB，實時定量PCR檢測FcγRⅡB mRNA表達，，Western blot法檢測FcγRⅡB蛋白表達。表達病毒和調節(jié)病毒共感染Ramos細胞，經1000ng/mL強力霉素（Dox）誘導，免疫熒光檢測FcγRⅡB的表達和FcγRⅡB與SLE患者血清免疫復合物（IC）中IgG Fc端的結合能力。LPS刺激感染后的Ramos細胞，ELISA法檢測過表達FcγRⅡB對Ramos細胞分泌IgM抗體的影響。 結果重組質粒經PCR、酶切及測序鑒定，測序結果顯示插入片段堿基序列與GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表達病毒滴度達106TU/mL，調節(jié)病毒滴度達105TU/mL，感染性良好。HT-1080細胞被病毒感染后經Dox誘導表達FcγRⅡB，免疫熒光染色結果顯示FcγRⅡB能夠在HT-1080細胞表達；實時熒光定量PCR和Western blot法結果顯示FcγRⅡB表達水平與誘導劑濃度正相關。免疫熒光結果顯示病毒感染后，Ramos細胞過表達FcγRⅡB且與IC中IgG Fc端有較好的結合能力。ELISA結果顯示過表達FcγRⅡB會下調Ramos細胞的IgM分泌水平。 結論成功構建了FcγRⅡB慢病毒誘導表達載體。經該慢病毒感染后Ramos細胞過表達FcγRⅡB且能下調該細胞分泌IgM型抗體的水平。
【關鍵詞】：FcγRⅡB 慢病毒誘導表達載體 調控表達 抗體分泌
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符號說明7-9
• 前言9-11
• 第一部分 人 FcγRⅡB 慢病毒表達載體的構建及其在 HT-1080 細胞的表達11
• 引言11
• 材料與方法11-25
• 結果25-27
• 討論27-29
• 附圖29-38
• 第二部分 過表達 FcγRⅡB 對 Ramos 細胞抗體分泌的影響38
• 引言38
• 材料與方法38-43
• 結果43-44
• 討論44-46
• 附圖46-49
• 全文總結49-50
• 參考文獻50-53
• 綜述53-67
• 參考文獻60-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章68

【參考文獻】

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1 梁淑慧;李翠;劉志輝;朱海龍;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血循環(huán)免疫復合物和補體水平變化及其臨床意義[J];國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報;2010年01期

本文編號：1130190