發(fā)布時(shí)間：2017-11-02 05:25

  本文關(guān)鍵詞：人FcγRIIB慢病毒表達(dá)載體的制備及其功能初步研究

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【摘要】：目的構(gòu)建人FcγRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體，檢測(cè)人FcγRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體在HT-1080細(xì)胞表面可調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)，并初步研究其對(duì)B細(xì)胞功能的影響。 方法以人mRNA為模版逆轉(zhuǎn)錄獲得FcγRⅡB基因片段，并將其克隆入慢病毒表達(dá)質(zhì)粒TRE，構(gòu)建TRE-FcγRⅡB慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒。將慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒調(diào)節(jié)質(zhì)粒Tet分別與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，分別包裝表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒，分別測(cè)定表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒感染滴度。表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒共感染HT-1080細(xì)胞，經(jīng)梯度濃度強(qiáng)力霉素（Dox）誘導(dǎo)，免疫熒光染色檢測(cè)HT-1080細(xì)胞表達(dá)FcγRⅡB，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)FcγRⅡB mRNA表達(dá)，，Western blot法檢測(cè)FcγRⅡB蛋白表達(dá)。表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒共感染Ramos細(xì)胞，經(jīng)1000ng/mL強(qiáng)力霉素（Dox）誘導(dǎo)，免疫熒光檢測(cè)FcγRⅡB的表達(dá)和FcγRⅡB與SLE患者血清免疫復(fù)合物（IC）中IgG Fc端的結(jié)合能力。LPS刺激感染后的Ramos細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)過(guò)表達(dá)FcγRⅡB對(duì)Ramos細(xì)胞分泌IgM抗體的影響。 結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定，測(cè)序結(jié)果顯示插入片段堿基序列與GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表達(dá)病毒滴度達(dá)106TU/mL，調(diào)節(jié)病毒滴度達(dá)105TU/mL，感染性良好。HT-1080細(xì)胞被病毒感染后經(jīng)Dox誘導(dǎo)表達(dá)FcγRⅡB，免疫熒光染色結(jié)果顯示FcγRⅡB能夠在HT-1080細(xì)胞表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法結(jié)果顯示FcγRⅡB表達(dá)水平與誘導(dǎo)劑濃度正相關(guān)。免疫熒光結(jié)果顯示病毒感染后，Ramos細(xì)胞過(guò)表達(dá)FcγRⅡB且與IC中IgG Fc端有較好的結(jié)合能力。ELISA結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)FcγRⅡB會(huì)下調(diào)Ramos細(xì)胞的IgM分泌水平。 結(jié)論成功構(gòu)建了FcγRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體。經(jīng)該慢病毒感染后Ramos細(xì)胞過(guò)表達(dá)FcγRⅡB且能下調(diào)該細(xì)胞分泌IgM型抗體的水平。
【關(guān)鍵詞】：FcγRⅡB 慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體 調(diào)控表達(dá) 抗體分泌
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符號(hào)說(shuō)明7-9
• 前言9-11
• 第一部分 人 FcγRⅡB 慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其在 HT-1080 細(xì)胞的表達(dá)11
• 引言11
• 材料與方法11-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-29
• 附圖29-38
• 第二部分 過(guò)表達(dá) FcγRⅡB 對(duì) Ramos 細(xì)胞抗體分泌的影響38
• 引言38
• 材料與方法38-43
• 結(jié)果43-44
• 討論44-46
• 附圖46-49
• 全文總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述53-67
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 梁淑慧;李翠;劉志輝;朱海龍;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血循環(huán)免疫復(fù)合物和補(bǔ)體水平變化及其臨床意義[J];國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào);2010年01期

本文編號(hào)：1130190