本文關鍵詞：不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成影響的研究

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【摘要】：銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginoisa, PA）為臨床常見菌，在醫(yī)院內感染中占有相當重要的地位，主要引起通風性呼吸道感染、燒傷性繼發(fā)性感染和囊性纖維化病人的繼發(fā)性肺炎。由于PA對多種常用抗生素(如某些β-內酰胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類及氯霉素等)耐藥，因此給臨床治療造成許多困難。PA耐藥的原因是多方面的，其中之一就是細菌生物被膜(bacterialbiofilm，BF)的形成。細菌生物被膜，又稱菌膜，，是指細菌吸附于固體物質表面后(如醫(yī)用有機材料或機體豁膜表面)，分泌多糖基質、纖維蛋白、脂蛋白等多糖-蛋白復合物，使細菌相互粘連并將其自身菌體包裹于生物被膜之中，從而形成致密的膜樣狀態(tài)，造成泛耐藥。 多糖基質是形成生物膜的必要條件，糖尿病患者體內的高糖環(huán)境對銅綠假單胞菌形成生物膜是否有影響？本課題通過研究不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成的影響，為臨床糖尿病患者銅綠假單胞菌感染提供治療思路。 本研究收集了42株臨床分離的銅綠假單胞菌，對其進行耐藥性測定、生物膜形成能力檢測、耐藥性與生物膜相關性分析、不同濃度葡萄糖對生物膜形成能力和形成過程的影響研究。1、銅綠假單胞菌的耐藥率與生物被膜形成能力的相關性分析 菌株來源：連續(xù)收集山西醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院2012年3月到2012年6月臨床分離的42株銅綠假單胞菌菌株。 方法：采用平板結合結晶紫染色法建立銅綠假單胞菌生物被膜模型，定量分析42株臨床分離的銅綠假單胞菌生物被膜形成能力；采用瓊脂倍比稀釋法測定菌株的耐藥性；概率法檢驗生物被膜形成能力與耐藥性的相關性。 結果：42株臨床分離的銅綠假單胞菌對丁胺卡那耐藥率為2.4%；對頭孢他啶、哌拉西林/舒巴坦均為11.9%；對左氧氟沙星為14.2%，對哌拉西林為19.0%，對美羅培南的耐藥率達到28.6%；對頭孢哌酮-舒巴坦為35.7%，對氨曲南為40.5%。41株（97.6%）具有生物膜形成能力，其中生物膜形成能力弱的為19株（45.2%）、生物膜形成能力強的22株（52.4%）、1株菌（2.4%）沒有形成生物被膜。銅綠假單胞菌對頭孢哌酮-舒巴坦的耐藥性隨著生物被膜的形成能力增強而增強。 2、半定量檢測不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成能力的影響菌株來源：本文第一部分篩選出的22株生物膜強陽性銅綠假單胞菌(A570≥1.0)。 方法：采用7組濃度葡萄糖培養(yǎng)液構建銅綠假單胞菌生物膜感染模型，結合結晶紫染色法對生物被膜形成能力進行半定量分析。 結果：生物膜結晶紫染色半定量實驗顯示，隨培養(yǎng)液中葡萄糖濃度的升高，22株待測菌的生物膜形成能力均呈上升趨勢(擬合直線斜率均0)；其中4株待測菌在葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時上升趨勢明顯，擬合直線斜率為0.025~0.031；其余18株菌的A570值變化不顯著，擬合直線斜率為0.004~0.019。 3、觀察不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成過程的影響菌株來源：38號銅綠假單胞菌，為本文第二部分中葡萄糖對生物膜形成能力影響最大的菌株，擬合直線斜率為0.031。 方法：采用7組濃度葡萄糖培養(yǎng)液構建PA生物膜模型，激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察生物膜的形成過程及厚度。 結果：CLSM觀察葡萄糖對生物膜形成過程影響實驗表明：與無糖組及低濃度葡萄糖組相比，當葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時，生物膜形成速度加快、成熟時間減少、粘附能力增強、厚度增加(P 0.05)。 結論: 1、該院銅綠假單胞菌對丁胺卡那最敏感；對頭孢他啶、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、哌拉西林的敏感性次之；對頭孢哌酮/舒巴坦和氨曲南的耐藥率最高。 2、該院銅綠假單胞菌生物膜形成陽性率高，而且對頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥性與生物被膜的形成能力呈正相關關系(P=0.047)。 3、對于銅綠假單胞菌生物膜陽性株而言，生長環(huán)境中葡萄糖的存在對其生物膜的形成有誘導作用。隨著葡萄糖濃度的增加，生物膜成熟速度加快、成熟時間減少、粘附能力增強。 4、葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時，銅綠假單胞菌的生物膜厚度逐漸增加（P0.05），葡萄糖濃度≥20mmol/L時，生物膜厚度顯著增加（P0.01）。
【關鍵詞】：銅綠假單胞菌 耐藥性 生物膜 葡萄糖 半定量檢測 雙重熒光染色 激光掃描共聚焦顯微鏡
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.991
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 第一部分: 銅綠假單胞菌的耐藥率與生物被膜形成能力的相關性分析14-26
• 1 材料與方法14-19
• 2 結果19-24
• 3 討論24-26
• 第二部分：半定量檢測不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成能力的影響26-36
• 1 材料與方法26-29
• 2 結果29-33
• 3 討論33-36
• 第三部分：觀察不同濃度葡萄糖對銅綠假單胞菌生物膜形成過程的影響36-46
• 1 材料與方法36-39
• 2 結果39-43
• 3 討論43-46
• 課題小結46-47
• 參考文獻47-51
• 綜述51-60
• 參考文獻56-60
• 主要英文縮略語與中文對照表60-62
• 個人簡歷62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：1129596