不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成影響的研究
本文關(guān)鍵詞：不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成影響的研究
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【摘要】：銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginoisa, PA）為臨床常見(jiàn)菌，在醫(yī)院內(nèi)感染中占有相當(dāng)重要的地位，主要引起通風(fēng)性呼吸道感染、燒傷性繼發(fā)性感染和囊性纖維化病人的繼發(fā)性肺炎。由于PA對(duì)多種常用抗生素(如某些β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類及氯霉素等)耐藥，因此給臨床治療造成許多困難。PA耐藥的原因是多方面的，其中之一就是細(xì)菌生物被膜(bacterialbiofilm，BF)的形成。細(xì)菌生物被膜，又稱菌膜，，是指細(xì)菌吸附于固體物質(zhì)表面后(如醫(yī)用有機(jī)材料或機(jī)體豁膜表面)，分泌多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂蛋白等多糖-蛋白復(fù)合物，使細(xì)菌相互粘連并將其自身菌體包裹于生物被膜之中，從而形成致密的膜樣狀態(tài)，造成泛耐藥。 多糖基質(zhì)是形成生物膜的必要條件，糖尿病患者體內(nèi)的高糖環(huán)境對(duì)銅綠假單胞菌形成生物膜是否有影響？本課題通過(guò)研究不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響，為臨床糖尿病患者銅綠假單胞菌感染提供治療思路。 本研究收集了42株臨床分離的銅綠假單胞菌，對(duì)其進(jìn)行耐藥性測(cè)定、生物膜形成能力檢測(cè)、耐藥性與生物膜相關(guān)性分析、不同濃度葡萄糖對(duì)生物膜形成能力和形成過(guò)程的影響研究。1、銅綠假單胞菌的耐藥率與生物被膜形成能力的相關(guān)性分析 菌株來(lái)源：連續(xù)收集山西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2012年3月到2012年6月臨床分離的42株銅綠假單胞菌菌株。 方法：采用平板結(jié)合結(jié)晶紫染色法建立銅綠假單胞菌生物被膜模型，定量分析42株臨床分離的銅綠假單胞菌生物被膜形成能力；采用瓊脂倍比稀釋法測(cè)定菌株的耐藥性；概率法檢驗(yàn)生物被膜形成能力與耐藥性的相關(guān)性。 結(jié)果：42株臨床分離的銅綠假單胞菌對(duì)丁胺卡那耐藥率為2.4%；對(duì)頭孢他啶、哌拉西林/舒巴坦均為11.9%；對(duì)左氧氟沙星為14.2%，對(duì)哌拉西林為19.0%，對(duì)美羅培南的耐藥率達(dá)到28.6%；對(duì)頭孢哌酮-舒巴坦為35.7%，對(duì)氨曲南為40.5%。41株（97.6%）具有生物膜形成能力，其中生物膜形成能力弱的為19株（45.2%）、生物膜形成能力強(qiáng)的22株（52.4%）、1株菌（2.4%）沒(méi)有形成生物被膜。銅綠假單胞菌對(duì)頭孢哌酮-舒巴坦的耐藥性隨著生物被膜的形成能力增強(qiáng)而增強(qiáng)。 2、半定量檢測(cè)不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成能力的影響菌株來(lái)源：本文第一部分篩選出的22株生物膜強(qiáng)陽(yáng)性銅綠假單胞菌(A570≥1.0)。 方法：采用7組濃度葡萄糖培養(yǎng)液構(gòu)建銅綠假單胞菌生物膜感染模型，結(jié)合結(jié)晶紫染色法對(duì)生物被膜形成能力進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：生物膜結(jié)晶紫染色半定量實(shí)驗(yàn)顯示，隨培養(yǎng)液中葡萄糖濃度的升高，22株待測(cè)菌的生物膜形成能力均呈上升趨勢(shì)(擬合直線斜率均0)；其中4株待測(cè)菌在葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時(shí)上升趨勢(shì)明顯，擬合直線斜率為0.025~0.031；其余18株菌的A570值變化不顯著，擬合直線斜率為0.004~0.019。 3、觀察不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成過(guò)程的影響菌株來(lái)源：38號(hào)銅綠假單胞菌，為本文第二部分中葡萄糖對(duì)生物膜形成能力影響最大的菌株，擬合直線斜率為0.031。 方法：采用7組濃度葡萄糖培養(yǎng)液構(gòu)建PA生物膜模型，激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察生物膜的形成過(guò)程及厚度。 結(jié)果：CLSM觀察葡萄糖對(duì)生物膜形成過(guò)程影響實(shí)驗(yàn)表明：與無(wú)糖組及低濃度葡萄糖組相比，當(dāng)葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時(shí)，生物膜形成速度加快、成熟時(shí)間減少、粘附能力增強(qiáng)、厚度增加(P 0.05)。 結(jié)論: 1、該院銅綠假單胞菌對(duì)丁胺卡那最敏感；對(duì)頭孢他啶、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、哌拉西林的敏感性次之；對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦和氨曲南的耐藥率最高。 2、該院銅綠假單胞菌生物膜形成陽(yáng)性率高，而且對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥性與生物被膜的形成能力呈正相關(guān)關(guān)系(P=0.047)。 3、對(duì)于銅綠假單胞菌生物膜陽(yáng)性株而言，生長(zhǎng)環(huán)境中葡萄糖的存在對(duì)其生物膜的形成有誘導(dǎo)作用。隨著葡萄糖濃度的增加，生物膜成熟速度加快、成熟時(shí)間減少、粘附能力增強(qiáng)。 4、葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時(shí)，銅綠假單胞菌的生物膜厚度逐漸增加（P0.05），葡萄糖濃度≥20mmol/L時(shí)，生物膜厚度顯著增加（P0.01）。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞菌 耐藥性 生物膜 葡萄糖 半定量檢測(cè) 雙重?zé)晒馊旧?/strong> 激光掃描共聚焦顯微鏡
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378.991
【目錄】：
- 摘要5-8
- Abstract8-12
- 前言12-14
- 第一部分: 銅綠假單胞菌的耐藥率與生物被膜形成能力的相關(guān)性分析14-26
- 1 材料與方法14-19
- 2 結(jié)果19-24
- 3 討論24-26
- 第二部分：半定量檢測(cè)不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成能力的影響26-36
- 1 材料與方法26-29
- 2 結(jié)果29-33
- 3 討論33-36
- 第三部分：觀察不同濃度葡萄糖對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成過(guò)程的影響36-46
- 1 材料與方法36-39
- 2 結(jié)果39-43
- 3 討論43-46
- 課題小結(jié)46-47
- 參考文獻(xiàn)47-51
- 綜述51-60
- 參考文獻(xiàn)56-60
- 主要英文縮略語(yǔ)與中文對(duì)照表60-62
- 個(gè)人簡(jiǎn)歷62-63
- 致謝63
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：1129596
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