本文關(guān)鍵詞：p53在MVC感染致靶細(xì)胞WRD凋亡中的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： p53 細(xì)胞凋亡 博卡病毒MVC 流式細(xì)胞術(shù)

【摘要】：目的MVC（Minute Virus of canine）是博卡病毒的一種，課題組早期研究發(fā)現(xiàn)MVC感染其嗜性細(xì)胞WRD(Walter Reed Dog)后會(huì)引發(fā)DNA損傷、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期阻滯，但是到目前為止，，其所致凋亡的具體途徑并不完全清楚。因此，本文通過研究MVC感染W(wǎng)RD后p53及其下游各個(gè)靶基因表達(dá)變化、p53抑制劑干預(yù)作用，以此探究p53基因在MVC感染致靶細(xì)胞凋亡中的分子機(jī)制。 方法首先觀察博卡病毒MVC感染W(wǎng)RD細(xì)胞后細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上的改變；通過TUNEL法分析MVC感染W(wǎng)RD細(xì)胞所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；通過檢測(cè)細(xì)胞活力及流式細(xì)胞儀分析，觀察p53抑制劑在病毒感染中細(xì)胞活力及靶細(xì)胞凋亡所起到的作用；在確認(rèn)p53在凋亡中的作用后，通過PCR以及Real-time PCR來分析p53在mRNA水平的變化；通過蛋白免疫印跡法檢測(cè)P53蛋白水平表達(dá)變化，同時(shí)分析其磷酸化水平以及下游的P21、FAS-L表達(dá)水平的變化。 結(jié)果1.通過TUNEL法觀察到MVC感染的細(xì)胞中有明顯的細(xì)胞凋亡小體形成；2. Real-time PCR結(jié)果顯示，p53mRNA表達(dá)量在MVC感染后12h明顯上升，與此同時(shí)，P53蛋白免疫印跡結(jié)果與PCR結(jié)果一致；3. P53-Ser15和P21的表達(dá)量均隨著感染時(shí)間的增加呈現(xiàn)一定的增強(qiáng)，F(xiàn)AS-L的表達(dá)量并沒有出現(xiàn)明顯的變化。4.細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果顯示：p53抑制劑干預(yù)組的細(xì)胞活力高于未干預(yù)組；5.流式細(xì)胞分析顯示p53抑制劑降低了MVC誘導(dǎo)的靶細(xì)胞凋亡程度。 結(jié)論MVC感染W(wǎng)RD細(xì)胞致其細(xì)胞病變后，p53在mRNA及蛋白表達(dá)水平均增高，P53磷酸化水平增強(qiáng)。p53表達(dá)升高促進(jìn)下游基因p21的表達(dá)。MVC感染并未引起FAS-L的表達(dá)變化，提示死亡受體途徑可能未介入MVC致靶細(xì)胞凋亡過程。P53抑制劑能夠降低MVC感染致靶細(xì)胞WRD的細(xì)胞凋亡程度。總之，p53參與了MVC感染致靶細(xì)胞WRD的凋亡過程。
【關(guān)鍵詞】：p53 細(xì)胞凋亡 博卡病毒MVC 流式細(xì)胞術(shù)
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 縮略語索引7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-24
• 結(jié)果24-36
• 討論36-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 文獻(xiàn)綜述46-63
• 綜述參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64

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