本文關(guān)鍵詞：EGFP-Luc-Hepa1-6細胞系的構(gòu)建及其在小鼠肝癌模型中的應用

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【摘要】：目的:構(gòu)建帶有增強型綠色熒光蛋白EGFP及熒光素酶luciferase的真核表達載體p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,對肝癌細胞系Hepa1-6轉(zhuǎn)染后進行穩(wěn)定篩選,并將表達該載體的細胞系應用于小鼠原位肝癌模型構(gòu)建,以對小鼠肝癌細胞進行穩(wěn)定標記與活體示蹤。方法:對p GL3-Basic質(zhì)粒進行Xba I酶切、Klenow片段補平黏端、Xho I酶切獲得luciferase小片段,與Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP質(zhì)粒獲得的載體大片段連接,獲得重組質(zhì)粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鑒定、測序比對確認序列完全正確后,以重組載體轉(zhuǎn)染Hepa1-6細胞進行穩(wěn)定篩選,以熒光顯微鏡觀察EGFP表達,報告基因?qū)嶒炁cLuminaⅡ成像系統(tǒng)檢測熒光素酶活性。確認該細胞系中的質(zhì)粒得到表達后,以該細胞系進行C57BL/6小鼠肝臟原位接種構(gòu)建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系統(tǒng)連續(xù)活體監(jiān)測肝癌的生長,取離體的肝癌組織制備石蠟切片(HE染色)和冰凍切片(免疫熒光染色)分別觀察離體腫瘤組織病理學特征及其中肝癌細胞綠色熒光蛋白表達情況。結(jié)果:成功構(gòu)建表達p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP載體的Hepa1-6細胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以該細胞系成功構(gòu)建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,實現(xiàn)小鼠肝癌細胞的活體示蹤與體外標記。結(jié)論:成功構(gòu)建EGFP-Luc-Hepa1-6細胞系,且以此細胞系構(gòu)建的小鼠原位肝癌模型可以同時實現(xiàn)小鼠肝癌生長的連續(xù)活體監(jiān)測與離體組織檢測。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學基礎(chǔ)部醫(yī)學遺傳學與發(fā)育生物學教研室腫瘤生物學國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 肝癌 Hepa- EGFP Luciferase 小鼠 載體
【基金】：國家自然科學基金重大研究計劃培育項目(91029731),國家自然科學基金青年科學基金(81100307),國家自然科學基金青年科學基金(81401940) 腫瘤生物學國家重點實驗室(第四軍醫(yī)大學)開放基金(Cbskl201408)資助項目
【分類號】：R735.7;R-332
【正文快照】： 肝癌的動物模型是研究肝癌的發(fā)病機制、藥物的療效評價、開發(fā)新的治療方法的重要工具,已廣泛的應用于肝癌的基礎(chǔ)研究中。其構(gòu)建方法可以分為腫瘤移植、基因修飾、病毒感染、化學試劑誘導等[1]。Schneider等[2]對2周齡小鼠進行腹腔注射二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN),42

【共引文獻】

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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【二級參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：1122245